林树柱，杨 帆，刘先菊，张连峰

（中国医学科学院，北京协和医学院，医学实验动物研究所，卫生部人类疾病比较医学重点实验室，国家中医药管理局人类疾病动物模型三级实验室，北京 100021）

鸟纲是动物种类最多的一个纲，世界上现存的鸟类有近9000种。鸟类与人类的关系也极为密切，有些鸟类作为宠物被人类豢养在家中，有些作为经济鸟类被大规模饲养，还有些鸟类是珍惜保护动物。鸟类的疫病常常会引起鸟的大量死亡，而且有些疫病甚至会传染给人类，因此对鸟类疫病进行监测，对保障国民经济发展与人类健康具有重要意义。血清学检测是动物病原检疫的重要手段，而标记的动物二级抗体是建立血清学检测技术的重要工具。但是世界范围内都缺乏标记的抗鸟类的二级抗体，为此本研究分离纯化了灰雁、鸬鹚、鸵鸟、小鹈、鸽子、鹅、孔雀、鹌鹑、贵妃鸡、草鹭、夜鹭、赤嘴潜鸭、燕鸥、长脚鹬、虎皮鹦鹉、翘鼻麻鸭等16种禽类的IgY，免疫大耳白兔制备了兔抗这些鸟类的二级抗体，并用辣根过氧化物酶（HRP）对制备的二级抗体进行了标记，为鸟类血清学检测体系的建立提供了工具。

1 材料和方法

1.1 16种鸟类IgY的分离纯化

孔雀、鹌鹑、贵妃鸡、草鹭、夜鹭去脂的卵黄液，采用亲和层析和饱和硫酸铵沉淀的方法进一步纯化IgY，去脂卵黄液稀释后过 Hitrap IgY Purification HP亲和柱，亲和产物再利用饱和硫酸铵进一步沉淀。具体纯化方法参照文献［1］进行。

赤嘴潜鸭、燕鸥、长脚鹬、虎皮鹦鹉、翘鼻麻鸭IgY通过切胶的方法进行纯化［3］。……