赵立红

(泰山医学院附属泰山医院检验科，山东泰安 271000)

风疹(rubella virus，RV)是披膜病毒科风疹病毒属的唯一成员，人是唯一的自然宿主。孕妇妊娠前3个月感染RV，RV会通过胎盘感染胎儿，导致孕妇流产或死胎，甚至引起新生儿一系列的器官畸形等先天性风疹综合征(congenital rubella syndrome，CRS)[1]。因此，采用及时准确快捷的RV诊断方法具有十分重要的意义。我们采用TaqMan探针实时荧光定量RT-PCR方法检测孕妇血清标本中风疹病毒RNA，并与传统方法-风疹病毒免疫球蛋白M(IgM)酶联免疫吸附测定法(ELISA)进行比较分析。

1 材料与方法

1.1金标准

细胞培养法

1.2临床标本

收集2008年6月至2010年10月泰安市中心医院产前诊断门诊细胞培养法确诊的风疹病毒阳性孕妇血清标本126例，年龄22～36岁，平均年龄28岁；正常对照组107例为女性健康查体者，无与风疹病人接触史，年龄24～29岁，平均年龄26岁。

1.3仪器与试剂

PE7500全自动PCR扩增分析仪为美国PE公司产品；风疹病毒实时荧光定量RT-PCR检测试剂盒购自中山医科大学达安基因诊断有限公司；DY-1型酶标仪系美国BIO-TEK公司产品；风疹病毒ELISA IgM试剂盒购自美国罗氏公司。

1.4风疹病毒ELISA IgM抗体测定

严格按照试剂盒说明书操作。

1.5实时荧光定量RT-PCR检测风疹病毒RNA。

严格按照试剂盒说明书操作。反应条件：93℃预变性2min，然后93℃变性45s，55℃退火60s，先做10个循环，最后按93℃变性30s，55℃退火45s，做30个循环。于PE7500全自动PCR扩增分析仪上进行 PCR 扩增。

1.6阳性判定标准

实时荧光定量RT-PCR法

如果Ct值<27，则实验结果为阳性。

ELISA IgM 抗体法

以待检血清吸光度值(P)与阴性对照血清吸光度值(N)的比值P/N≥2.1为阳性，波长为450nm。

1.7统计学处理

直线回归与相关、敏感度、特异度应用SPSS 10.0软件以及PEMS3.1软件进行统计学分析。……