卢军峰，解乃昌，姬逸男

(广西医科大学第一附属医院胃肠腺体外科，广西 南宁 530021)

近几年众多学者在甲状腺乳头状癌(papillary thyroid cancer，PTC)中检测到高频率的BRAFV600E基因突变，并且认为BRAFV600E突变与细胞周期调控因子p27的表达异常密切联系相关，其突变或表达异常会引起细胞的失控性生长，进而发生肿瘤和淋巴结转移［1］。本文通过检测PTC中BRAFV600E突变及p27蛋白的表达测定，并结合临床病理参数的研究，为PTC颈淋巴结转移的危险因素评估提供一定的依据。

1 材料和方法

1.1 临床资料:收集广西医科大学第一附属医院病理科2004年9月至2010年3月存档83例PTC蜡块，均为首次手术且术前未行放射碘治疗。术后及实验前经2位病理科专家再次确诊。患者年龄最小12岁，最大76岁，平均年龄45岁。男性17例，女性66例。

1.2 DNA提取、琼脂糖凝胶电泳、PCR－SSCP检测、BRAFV600E基因DNA序列分析:将各蜡块对照相应的HE切片，切成8μm厚切片，烤片脱蜡脱水并刮入1.5mL EP管中，经消化裂解粗提DNA。以DNA提取液为反应模板，用特异性引物扩增BRAF基因第15外显子。扩增产物皆经琼脂糖凝胶电泳鉴定目的基因片段。以12%非变性聚丙烯酰胺凝胶垂直平板电泳，银染。回收及纯化经PCR－SSCP筛选出有突变的DNA扩增样品。由北京诺赛基因组研究中心有限公司对样品测序。

1.3 免疫组织化学法:采用链霉菌抗生物素蛋白一过氧化物酶连接法(SP法):按抗体说明书(福建迈新生物技术公司)推荐的高压抗原修复法及相应实验步骤操作。由试剂公司提供阳性对照片，以PBS代替一抗作阴性对照。

1.4 p27蛋白半定量表达的测定:p27蛋白阳性定位于胞核或胞浆。……