贾学斌 李兴启 张瀛 朱耀国

Ca2+在体内有非常广泛的生理作用[1～3]，Ca2+参与耳蜗声机械-电转换、内耳声感受的频率选择及基底膜振动的非对称性等过程。维持细胞内Ca2+平衡是发挥正常耳蜗功能的保证。细胞内Ca2+稳态的调节机制主要包括两方面，即增加胞浆内Ca2+浓度和减少胞浆内Ca2+浓度。增加胞浆内Ca2+浓度途径有：细胞膜上的Ca2+通道开放、Na+/ Ca2+交换、Ca2+/H+交换及Ca2+被动扩散入胞等；而减少胞浆内Ca2+浓度的方式主要有Ca2+-ATP酶将Ca2+泵出细胞或泵入Ca2+库和Na+/ Ca2+交换。若Ca2+-ATP酶的功能被抑制必将引起胞浆内Ca2+超载，可导致细胞损伤甚至死亡。L-精氨酸被认为是合成NO的底物，它可在一氧化氮合酶(NOS)及黄素腺嘌呤二核苷酸(FAD)、黄素腺嘌呤单核苷酸(FMN)、四氢生物喋呤(BH4)、还原型尼克酰胺嘌呤二核苷酸(NADPH)等转氢、转电子体的协同作用下生成NO和L-胍氨酸。由此，L-精氨酸激活NO/cGMP通路，产生cGMP，进而激活磷酸激酶cGK-1对功能酶磷酸化。L-精氨酸激活NO/cGMP通路使磷酸激酶cGK-1活化后，可对多种蛋白质进行磷酸化，其中，对细胞内磷脂酶C的磷酸化将减少磷酸肌醇IP3的含量，进而起到降低胞内Ca2+浓度的作用，从而调节细胞胞浆内Ca2+的平衡。

在耳蜗中存在着NO/cGMP通路的各关键酶及Ca2+ATP酶。本实验用Ca2+-ATP酶抑制剂造模，使胞内Ca2+超载，然后加入L-精氨酸以激活NO/cGMP通路，观察耳蜗中L-精氨酸是否对Ca2+-ATP酶抑制剂有一定的拮抗作用。

1 材料与方法

1.1主要试剂和仪器 基础液：人工外淋巴液(APL)(mM)：NaCl 137，KCl 5，CaCl2，NaH2PO41，Glucose 11，NaHCO312，MgCl21，用前将pH调至7.2～7.4，用全自动冰点渗透压仪调节渗透压到300±2 mOsm/L。实验试剂：L-精氨酸、环磷酸鸟苷(cGMP)、 Ca2+-ATP酶抑制剂(Cyclopiazonic acid)、一氧化氮合酶(NOS)抑制剂L-NNA、亚甲基蓝(Methylene blue)。……