袁丹丹, 张伟国

(江南大学工业生物技术教育部重点实验室,江苏无锡 214122)

L-缬氨酸产生菌的原生质体融合及抗高糖融合株的筛选

袁丹丹, 张伟国＊

(江南大学工业生物技术教育部重点实验室,江苏无锡 214122)

通过原生质体融合技术选育出一株抗高糖的融合株。以黄色短杆菌(B revibacterium flavum)NV 128和黄色短杆菌(B.f lavum)JV 16(Leu-Ile-M et-)为亲本菌株,通过单灭活原生质体融合、高糖梯度平板筛选及进一步的硫酸二乙酯(DES)诱变,获得了一株L-缬氨酸高产菌NJ-237。同时研究了影响原生质体形成、再生的3种重要条件(青霉素、酶和渗透压稳定剂),并确定了其最佳处理浓度和时间。该融合株经7 L发酵罐培养72 h L-缬氨酸达到46.8 g/L,糖酸转化率为27.7%,比两亲株都有显著提高。

L-缬氨酸;原生质体融合;高糖抗性

支链氨基酸包括L-缬氨酸、L-亮氨酸和L-异亮氨酸,都属于人体必需氨基酸,因其特殊的结构和功能在人类生命代谢中占有非常重要的地位。L-缬氨酸应用范围广阔,在医药、食品和饲料等方面有着其它营养物质不可替代的作用,尤其是在医药方面,如配制氨基酸输液和其它治疗药物,近年来研究发现,L-缬氨酸是一种治疗高血压特效药——缬沙坦的原料,其需求量猛增[1]。

原生质体融合(p rotop last fusion)是一种重要的基因组重组方法[2]。黄色短杆菌NV 128,α-氨基丁酸(α-AB)和γ-氨基丁酸 (γ-AB)抗性 ,培养条件粗放,可积累一定量的 L-缬氨酸;黄色短杆菌JV 16,培养条件较苛刻,但缬氨酸产量比NV 128要高。通过原生质体融合可能达到优势互补,筛选到培养条件粗放但产酸水平又高的理想融合子,为缬氨酸产生菌育种开辟一条新途径。……