杨 婧 张海风 王 媛 赵 勤 张新胜 单 杰

(郑州大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室,河南 郑州 450001)

癌症已经成为威胁人类健康的一大重要疾病,目前通常采用化疗、放疗、手术切除等方法进行癌症的治疗。但是癌症的治疗一般都很困难,并且预后不佳〔1〕。血色素氧化酶-1(HO-1)是哺乳动物细胞中广泛存在的一种可诱导酶,它是血色素在机体内被降解过程中的限速酶〔2〕,具有抗氧化,抗凋亡等效应,是细胞内重要的保护酶类,并与肿瘤的发生发展有很大关系。有研究表明在大部分癌症组织里,HO-1蛋白表达变得很高〔3〕,同时机体内对抗外界氧化作用的其他酶如超氧化物歧化酶(SOD)、超氧化氢酶 (CAT)等的表达和活效都有或高或低的下降〔4,5〕。这说明 HO-1在癌症的发生发展过程中可能起到了保护癌细胞的作用。Tet-off调控系统具有效能高、毒副作用小,并有严谨“开关”功能的优点,能够表达连接在其上的目的基因。可通过四环素类和盐酸多西环素〔强力霉素类 (Dox)〕药物对该系统进行诱导。前期的研究中构建 HO-1的真核表达载体,但该表达载体并不能人为地有效调控目的基因的表达。本实验采用 Tet-off调控表达系统载体,构建一个能够人为调控目的基因 HO-1表达的真核表达载体 pB I-EGFP-hHO-1,为后续实验奠定基础。

1 材料与方法

1.1 材料 限制性核酸内切酶 NheⅠ、MluⅠ(Freg Ments公司产品);限制性核酸内切酶 HindⅢ、BamHⅠ、Marker DL2000、10×Loading buffer、T4 DNA连接酶、核酸胶回收试剂盒 (TaKa-Ra公司产品);质粒小量提取试剂盒 (AxyPrep公司产品);Taq DNA聚合酶、dNTP、lipofectamine2000脂质体转染试剂、TR IZOL Reagent(Invitrogen公司产品);RPM I1640培养粉……