彭贤东，唐志立，王龙飞，李 林（四川南充市中心医院药剂科，南充市 637000）

氟甲栓的制备及质量控制

彭贤东＊，唐志立，王龙飞，李 林（四川南充市中心医院药剂科，南充市 637000）

目的：制备氟甲栓并建立其质量控制方法。方法：以聚乙二醇为基质，甲硝唑、诺氟沙星为主药制备栓剂；采用高效液相色谱法同时测定其中主药的含量；并考察该制剂室温放置12个月的稳定性。结果：所制制剂为乳白色至淡黄色的圆锥形栓，鉴别、检查均符合2005年版《中国药典》中的相关规定；甲硝唑、诺氟沙星检测浓度的线性范围分别为8.32～41.60、2.08～10.40µg·mL－1（r＝0.9999），平均回收率分别为98.23%、98.69%，日内、日间平均RSD分别为0.70%、0.62%，0.76%、0.65%；制剂12个月时各项指标未见明显变化。结论：该制剂制备工艺简便可行，质量稳定可控。

氟甲栓；甲硝唑；诺氟沙星；制备；质量控制；高效液相色谱法

氟甲栓是我院使用多年的医院自制制剂，临床用于治疗滴虫性阴道炎、非特异性阴道炎、老年性阴道炎等疾病。为更好地控制与完善制剂质量，配合医院制剂注册申报，笔者对该制剂的制备工艺和质量控制标准进行了研究，并获得制剂批准文号（川药制字H20080478）。现将其制备及质量控制方法报道如下。

1 材料

1.1 仪器

高效液相色谱（HPLC）系统，包括7125六通阀定量进样器、303型高压泵、HM型紫外检测器、Gilson714色谱工作站（法国Gilson公司）；UV-860紫外-可见分光光度计（法国康强公司）；BP211D分析天平（德国Sartorius公司）。

1.2 试药

甲硝唑原料药（广西河池市化工制药厂，批号：20070924，纯度：99.6%）；诺氟沙星原料药（河南康威药业有限公司，批号：070728，纯度：100.2%）；甲硝唑标准品（供含量测定用，批号：100191-200305）、诺氟沙星标准品（纯度：97.8%，批号：130450-200304）均由中国药品生物制品检定所提供；聚乙二醇6000（批号：20070804）、聚乙二醇4000（批号：20070602）、聚乙二醇400（批号：20071208）均由成都市科龙化工试剂厂提供；甘油（批号：20070330）、聚山梨酯80（批号：20060301）均由湖南尔康制药有限公司提供；氟甲栓（自制，批号：080122、080218、080303，规格：每粒含甲硝唑0.2g与诺氟沙星50mg）；辅料均为药用级，其余试剂均为分析纯，水为纯化水。

1.3 动物

家兔，由川北医学院实验动物中心提供，体质量：（2.5±0.5）kg，♀，合格证号：SCXK（川）2008-18。

2 处方与制备

2.1 处方

甲硝唑200g，诺氟沙星50g，聚乙二醇6000400g，聚乙二醇4000400g，聚乙二醇400400g，甘油100g，聚山梨酯8030g，纯化水100mL，共制成1000粒。

2.2 制备

取聚乙二醇6000、聚乙二醇4000、聚乙二醇400、甘油、聚山梨酯80、纯化水，置于适当容器中，水浴上加热熔化，冷却至60℃左右，再加入甲硝唑、诺氟沙星，边加边搅拌，混匀，灌注于事先涂有液状石蜡阴道栓模具中，待凝固后，脱模，包装，即得。

3 质量控制

3.1 性状

本品为乳白色至淡黄色的圆锥形栓。

3.2 鉴别

3.2.1 甲硝唑。取本品2粒，加乙醇20mL，置于水浴上加热使熔化，放冷，使基质凝固，过滤，滤液置于水浴上蒸干，得残渣。取残渣适量（约相当于甲硝唑10mg），加氢氧化钠试液2mL，微温，即呈紫红色，滴加稀盐酸使成酸性即变成黄色，再滴加过量氢氧化钠试液则变成橙红色；取残渣适量（约相当于甲硝唑0.1g），加硫酸溶液（3→100）4mL，应能溶解，加三硝基苯酚试液10mL，放置后生成黄色沉淀。

3.2.2 诺氟沙星。取“3.4.10”项下的供试品溶液5mL，置于水浴上蒸干，加丙二酸约50mg与醋酐1mL，置于80～90℃水浴上加热数分钟，溶液显红棕色。

3.2.3 在“3.4.4”项下记录的色谱中，供试品与对照品溶液主峰的保留时间一致。

3.3 检查

按2005年版《中国药典》（二部）栓剂项下相关内容检查，结果均符合规定[1]。

3.4 含量测定[2]

3.4.1 色谱条件与系统适用性试验。色谱柱：Hypersil ODS2C18（200mm×4.6mm，5µm）；流动相：0.025mol·L－1磷酸溶液（用三乙胺调节pH值至3.0±0.1）-乙腈（80∶20）；流速：1.0mL·min－1；柱温：室温；检测波长：278nm；进样量：20µL。理论塔板数按甲硝唑峰计算应不低于2000，甲硝唑峰和诺氟沙星峰及相邻杂质峰的分离度应符合要求。

3.4.2 标准品溶液的制备。分别精密称取甲硝唑、诺氟沙星标准品20.8、5.2mg，置于100mL容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。精密吸取上述溶液5mL，置于50mL容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为标准品溶液。

3.4.3 供试品溶液的制备。取本品10粒，精密称定，微温使其熔化，混匀，冷凝后，取1.65g（相当于1粒栓剂的量），精密称定，加流动相约60mL，置于40～50℃水浴上不断振摇，使溶解，置于冰浴中冷却1h，放置室温后，过滤，滤液置于100mL容量瓶中，用流动相分次洗涤容器和滤器，洗液并入容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，精密量取5mL，置于50mL容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，经0.45µm微孔滤膜过滤，精密量取续滤液5mL，置于50mL容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

3.4.4 干扰试验。根据处方制备不含甲硝唑和诺氟沙星的栓剂作为空白样品，再按“3.4.3”项下方法制备空白样品溶液。分别精密量取标准品、供试品、空白样品溶液20µL，注入HPLC仪，记录色谱。结果表明，空白辅料对本品无干扰。色谱见图1。

图1 高效液相色谱图A.标准品；B.供试品；C.空白样品；1.甲硝唑；2.诺氟沙星Fig 1HPLC chromatographyA.reference substance；B.sample；C.blank sample；1.metronidazole；2.norfloxacin

3.4.5 标准曲线的制备。精密吸取“3.4.2”项下贮备液1.0、1.5、2.5、4.0、5.0mL，分别置于25mL容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，按“3.4.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积。以峰面积（A）对浓度（C）进行线性回归，得甲硝唑、诺氟沙星回归方程分别为A＝3039C+819.5、A＝18698C－722.1（r＝0.9999）。结果，甲硝唑、诺氟沙星检测浓度的线性范围分别为8.32～41.60、2.08～10.40µg·mL－1。

3.4.6 精密度试验。按“3.4.5”项下方法制备甲硝唑浓度为12.48、20.8、33.28µg·mL－1（同时诺氟沙星浓度为3.12、5.20、8.32µg·mL－1）的标准品溶液，于同日内测定5次计算日内RSD；每日测定1次，连续测定5d计算日间RSD。结果，3种浓度的日内RSD甲硝唑分别为0.76%、0.62%、0.71%，平均RSD为0.70%；诺氟沙星分别为0.65%、0.53%、0.68%，平均RSD为0.62%；日间RSD甲硝唑分别为0.84%、0.64%、0.79%，平均RSD为0.76%；诺氟沙星分别为0.69%、0.58%、0.67%，平均RSD为0.65%，表明本方法精密度良好。

3.4.7 重复性试验。取同一供试品溶液（批号：080218）5份，按“3.4.1”项下色谱条件，分别进样5次，测定其含量。结果，甲硝唑、诺氟沙星含量的RSD分别为1.07%、0.74%，表明本方法重复性较好。

3.4.8 稳定性试验。精密吸取同一供试品溶液20µL，分别在0、2、4、6、8h进样，测定甲硝唑和诺氟沙星的峰面积。结果，甲硝唑、诺氟沙星RSD分别为0.85%、0.76%，表明供试品溶液在8h内稳定。

3.4.9 回收率试验。精密称取甲硝唑、诺氟沙星标准品适量，按处方比例加入其它辅料制成栓剂，再按“3.4.3”项下方法制备低、中、高3种浓度溶液，按“3.4.1”项下色谱条件进样测定，每种浓度平行测定3份，计算回收率，结果见表1。

表1 回收率试验结果（n＝9）Tab 1Results of recovery test（n＝9）

3.4.10 样品含量测定。取3个批号样品，分别按“3.4.3”项下方法制备成供试品溶液，再按“3.4.1”项下色谱条件分别精密量取标准品、供试品溶液20µL，注入HPLC仪，记录色谱，按外标法以峰面积计算含量，结果见表2。

3.5 制剂稳定性试验[1]

表2 样品含量测定结果（n＝3）Tab 2 Determination results of samples（n＝3）

将样品置于室温（20±5）℃下，分别于0、12、24、36、48、72h观察其外观，并测定甲硝唑、诺氟沙星的含量。结果，各项指标均无变化。继续留样观察12个月，抽样检查质量，结果各项指标未见明显变化。

3.6 家兔刺激性实验[3]

取健康成年家兔9只，并分为3组，即给药组（氟甲栓）、基质组（空白栓）和空白对照组（不给药）。取氟甲栓及空白栓适量（约相当于人体质量每1kg用药量的2～3倍），分别置于给药组及基质组家兔阴道中，观察12、24、48h家兔活动、精神、食欲情况。结果，家兔未见异常。在氟甲栓及空白栓与其黏膜接触48h后，将9只家兔全部处死，解剖后取出阴道，纵向切开，给药组、基质组均无红肿、充血现象，且与空白对照组比较无差异。

4 讨论

根据妇女阴道腔内生理学特点和制剂学规范，结合发病部位，本制剂选用圆锥形栓剂，使药物能与患处充分接触，且栓剂基质选用聚乙二醇类（水溶性基质），对组织细胞具有高度渗透性，使病变局部有较高的药物浓度，故能最大程度地发挥药效，能快速、高效地达到局部治疗目的。

取甲硝唑、诺氟沙星标准品适量，加流动相分别制成浓度为20、5µg·mL－1的溶液，用紫外-可见分光光度计在200～400nm波长内进行扫描。结果，甲硝唑与诺氟沙星均在278nm波长处有最大吸收，故选择278nm作为检测波长。

以0.025mol·L－1磷酸溶液（用三乙胺调节pH值至3.0±0.1）-乙腈（80∶20）为流动相，甲硝唑和诺氟沙星的理论塔板数分别为5696、4364，分离度为7.52，重复性试验中甲硝唑、诺氟沙星RSD分别为1.07%、0.74%。结果符合系统适用性试验要求，故采用该流动相条件进行测定。

用HPLC法同时测定甲硝唑、诺氟沙星的含量。试验证明，空白辅料对甲硝唑和诺氟沙星的测定没有干扰，表明本法专属性强，操作方法简便，结果准确，具有较好的回收率和精密度，可完全满足本制剂质量控制的要求。

综上所述，该制剂制备工艺简便可行，质量稳定可控。

[1] 国家药典委员会编.中华人民共和国药典（二部）[S].2005年版.北京：化学工业出版社，2005：附录7、178.

[2] 张春波，刘 欣，吴红英，等.高效液相色谱法测定甲硝唑诺氟沙星栓的含量[J].中国药事，2005，19（12）：741.

[3] 王 震，朱兴年，冒 镇，等.复方替硝唑栓剂的制备及质量控制[J].中国药房，2000，11（4）：158.

Preparation and Quality Control of Norfloxacin and Metronidazole Suppository

PENG Xian-dong，TANG Zhi-li，WANG Long-fei，LI Lin（Dept.of Pharmacy，Sichuan Nanchong Municipal Central Hospital，Nanchong 637000，China）

OBJECTIVE：To prepare norfloxacin and metronidazole suppository and establish a method for its quality control.METHODS：Suppository was prepared with PEG as matrix，metronidazole and norfloxacin as main ingredients.The contents of metronidazole and norfloxacin were determined by HPLC.The stability of preparation keeping for 12months at room temperature was observed.RESULTS：The preparation assumed ivory or faint yellow conic suppository and its property was up to the standard stated in Chinese Pharmacopeia（2005edition）in identification and test.The linear range of metronidazole and norfloxacin were 8.32～41.60µg·mL－1（r＝0.9999）and 2.08～10.40µg·mL－1（r＝0.9999）with average recovery rates at 98.23%and 98.69%，respectively.The mean intra-day RSD and inter-day RSD were 0.70%，0.62%and 0.76%，0.65%，respectively.No significant change was noted in each index of suppository at 12th month.CONCLUSION：The preparation is simple in preparation process，and controllable in quality.

Norfloxacin and metronidazole suppository；Metronidazole；Norfloxacin；Preparation；Quality Control；HPLC

R927.2；R984

A

1001-0408（2010）01-0061-03

2009-01-07

2009-04-02）