徐静娴，刘冰阳，森井英一，青世克之，贾心善，张劲松

（1.中国医科大学 附属第四医院眼科中心，眼科医院，辽宁省晶状体学重点实验室，沈阳 110005；2.中国医科大学 第93期临床医学7年制，沈阳 110001；3.大阪大学医学院病态病理教研室，日本 大阪 565-0871；4.中国医科大学 基础医学院病理学教研室，沈阳 110001）

癌干细胞是一小群具有在琼脂培养基中培养形成克隆，在体内移植分析中形成肿瘤的能力的细胞。癌干细胞最初发现于白血病［1］。近期研究发现，在长期培养的某些细胞株中也存在癌干细胞［2］。荧光染料Hoechst 33342对普通的癌细胞具有着色作用，但具有干细胞特性的癌细胞对该染料却具有排除能力，因此应用Hoechst 33342染色可分离癌干细胞。在荧光激活细胞分选分析中，带有较低水平Hoechst 33342染色的细胞被看作是具有癌干细胞特性的SP（side-population）细胞，相反，带有较高水平Hoechst 33342染色的细胞被看做是非SP细胞，即MP（main-population）细胞，不具有癌干细胞的特性。Kondo等［2］报告只有SP细胞既能生成SP细胞又能生成MP细胞，而MP细胞不具备这种能力。目前，利用SP细胞分选法来分离干细胞的方法已广泛应用于气管干细胞、肺癌干细胞的研究中［3］。

癌干细胞对凋亡具有抵抗性，但其机制目前尚不清楚。对癌干细胞进行抗凋亡能力分析困难的原因之一，就是分离癌干细胞时使用的Hoechst 33342染料具有能够诱导凋亡的毒性作用［4］。应用荧光激活细胞分选分离出来的SP细胞内包含的Hoechst 33342量比MP细胞低，SP细胞对凋亡的耐受性可能归因于Hoechst 33342的低含量，而非SP细胞本身的特性。因此，为了精确评估凋亡，SP细胞应使用不含有Hoechst 33342的系统进行分离。……