蔡丰波,张长山,魏 东

乳腺癌是世界女性最常见的恶性肿瘤之一,其早期发现确诊对于病人的预后有决定性的影响,但目前尚无较理想的血清标志物。常用的CA15-3 和CA27-29灵敏度和特异度均较差,而且对于早期肿瘤诊断效果更差,因此,寻找一种高灵敏度、高特异性的无创检查技术一直为科研和临床所关注。我们利用表面增强激光解吸附离子化时间飞行质谱(surface enhanced laser desorption/ionization time of flightmass spectrometry, SELDI-TOFMS)技术研究了正常人和乳腺癌患者血清蛋白质组构型,发现血清中3种蛋白质可作为一组特异性生物标志物用于诊断乳腺癌,其灵敏度和特异性均在90%以上。同时我们发现3 种蛋白质之一的M11368蛋白质具有单独应用于临床检测的前景,其灵敏度和特异度均明显优于现在应用的乳腺癌血清肿瘤标志物。

1 资料与方法

1.1标本来源标本取自2007 ～2009年中国人民解放军第150中心医院乳腺癌术前患者共194例,年龄30 ～70岁,平均47.3 岁。患者均无其他慢性疾病史,各年龄组分布如下:30 ～40岁12例, 40 ～50岁90例, 50 ～60岁80例, 60 ～70岁12例;正常对照组60人,平均49.0岁,其中30 ～40岁4人, 40 ～50岁32人, 50 ～60岁20人, 60 ～70岁4人。各乳腺癌病例均经手术后病理证实为乳腺浸润性癌,所有病例术前2 d采集空腹静脉血3 ～5 m L,经1 000 r/min离心取上清保存于-70℃冰箱中保存备用。

1.2 试剂和仪器尿素、乙腈、三氟乙酸、SPA(sinapinic acid)、CHAPS、Tris-HCl等均购自Sigma公司, ProteinChip(Biology System PBSⅡ)及其配套的IMAC30芯片、SELDITOFMS均购于美国CipherGen公司。

1.3 检测方法

1.3.1样品的收集 采集全血3 ～5 m L于干燥管后立即放入4℃冰箱,静置3 h后于4℃以1 000 r/min离心30 min,吸取血清分装成每管100 μL,做好标记,置于-70℃保存备用。

1.3.2样品的准备 融解冰冻血清并于4℃、1 000 r/min离心……