汪向飞 张晓丹 邓春艳 齐 晖 周汉新 邓绍平 李富荣

(暨南大学第二临床医学院深圳市人民医院临床研究中心,深圳 518020)

CD45是位于白细胞表面的白细胞共同抗原,是一种单链跨膜糖蛋白,属于蛋白酪氨酸磷酸酶家族成员[1]。根据其外显子的不同,可分为RA、RB、RO等9种异构体,分别在T细胞的发育、增殖中起着重要作用。CD45抗体可以阻断CD45对抑制位点的去磷酸化作用,从而阻断淋巴细胞活化信号的传导,抑制淋巴细胞的增殖和活化,最终形成免疫耐受[2]。调节性T细胞(regulator T cell Treg)是参与外周耐受性调节的一个重要细胞群[3]。Foxp3是CD4+CD25+Treg细胞的特异性标志,最新研究发现IL-7受体(CD127)在Treg低表达,与Foxp3表达呈负相关[4,5]。本研究利用转录因子Foxp3以及最新提出的CD4+CD25+CD127-三抗原标记法作为识别Treg细胞的标记物,研究CD4+CD25+CD127-T细胞在抗CD45RB抗体诱导的免疫耐受中所发挥的作用,从而阐明抗CD45RB抗体诱导免疫耐受作用的机制。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物 8～10周龄BALB/c小鼠,雌雄不限,体重20～25克,购自广东省医学实验动物中心(SCXK(粤)2008-0002);8～10周龄C57BL/6小鼠,雌性,体重20～25克,购自南方医科大学动物实验中心(SCXK(粤)2006-0025);饲养在暨南大学第二临床医学院实验动物中心(SPF级)。动物处置方法符合动物伦理学标准。

1.1.2 试剂及器材 抗小鼠CD45RB抗体(美国BioXcell);淋巴细胞分离液(达科为生物技术有限公司);抗 小 鼠 CD3-PEcy5、CD4-PEcy5、CD25-Alexa Fluro、CD127-PE 及相应同型对照(eBioscience);小鼠IL-2、IL-10检测试剂盒(R&D公司);ConA(Sigma公司);DNA Taq聚合酶(Fermentas);逆转录试剂盒(Fermentas);Real-Time PCR试剂盒(QIAGEN);流式细胞仪(EPICS ALTRA,美国贝克曼库尔特公司);荧光定量PCR仪(Roche);小鼠T淋巴细胞分离磁珠(德国美天妮);CCK-8试剂(日本同仁)。

1.2 方法

1.2.1 抗CD45RB抗体对小鼠心脏移植生存期的影响 采用小鼠腹部异位心脏移植模型,将供心主动脉与受体腹主动脉、供心肺动脉与受体下腔静脉分别行端侧吻合。……