周 健 田德英 许 东 张振纲 陈 淼 章述军 吴会玲

(武汉科技大学附属天佑医院感染科,武汉 430064)

乙型肝炎病毒(Hepatitis B Virus,HBV)感染人体,可导致持续性慢性感染。慢性肝炎、肝硬化以及肝细胞癌与慢性感染密切相关。目前应用的乙肝疫苗,虽然对HBV感染起到良好的预防作用,但对细胞内感染的HBV并不能最终彻底清除从而治愈乙型肝炎。Th1型免疫应答可有效地清除细胞内感染的微生物及肿瘤细胞。因此诱导Th1型免疫应答对乙型肝炎防治是必需的。近年来研究发现:细菌DNA中所含未甲基化的CpG二核苷酸序列(CpG motif)与抗原联合免疫动物,有强烈的免疫刺激效应,直接将CpG基序克隆到DNA质粒载体中,也具有相同增强的免疫反应[1]。

本试验选用构建的含对人敏感的CpG基序和乙肝病毒核心抗原的真核表达载体转染人外周血单核细胞来源的树突状细胞(Dendritic cells,DCs),转染后检测DC表面共刺激分子的表达及培养上清DC分泌Th1/Th2型细胞因子的水平,并研究培养上清诱导肝癌细胞株HepG2凋亡的作用和机制。

1 材料与方法

1.1 菌种及质粒 带绿色荧光基因的真核表达载体pEGFP-N1由华中科技大学同济医学院附属同济医院肝病研究所晏维博士赠送,大肠杆菌DH5α细胞株和肝癌细胞株HepG2由本实验室保存。

1.2 试剂 RPMI1640为Gibco公司产品,重组人GM-CSF、IL-4和 TNF-α购自 R&D公司;流式抗体CD40、CD80、CD83、CD86 和 HLA-DR 购自 eBioscience公司;Lipofectamine 2000为 Invitrogen试剂公司产品;细胞因子(IFN-γ、IL-2、IL-12、IL-4 和 IL-10)检测试剂盒(晶美生物技术有限公司进口分装),异硫氰酸荧光素(FITC)标记的Annexin V为晶美公司产品。

1.3 仪器 FACSort流式细胞仪为美国BD公司产品。

1.4 重组……