刘书亮,刘冬香,贾仁勇,韩新锋

金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,简称Sa)是引起食物中毒的重要致病菌,也是造成人和动物感染的主要病原菌之一。食源耐甲氧西林Sa(Methicillin-resistant S.aureus,MRSA)的污染研究成为世界各国研究的热点。我国养殖业中广泛应用抗菌药,也引起广泛关注。

由于传统的细菌分离鉴定、毒素检测以及耐药性测定费时费力,敏感性差。PCR方法快速敏感,在Sa的种属基因鉴定及耐药性分析中已有不少报告〔1-3〕。由于基因的表达受多种因素调控,基因检测与表型存在一定差异〔4〕。本研究旨在建立快速鉴定食源Sa(耐热核酸酶基因,nuc)及检测Sa对β-内酰胺类药物耐药性(β-内酰胺酶基因,blaZ;甲氧西林耐药基因,mecA)的多重PCR方法,分析食源MRSA污染情况,同时比较表型与基因型的一致性和差异性。现将结果报告如下。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 菌株 标准菌株:金黄色葡萄球菌ATCC33591为M RSA 阳性菌、ATCC29213为β-内酰胺酶阳性Sa,由中国农业大学动物医学院吴聪明博士惠赠;试验菌株:分离鉴定于成都等地市的猪源、牛源、鸡源动物性食品样品中的 79 株 Sa〔5〕,由四川农业大学食品微生物实验室保存。

1.1.2 培养基 Mueller-Hinton(M-H)肉汤:购自杭州微生物试剂有限公司;氨苄青霉素:由宝生物工程(大连)公司提供;LB培养基、氨苄青霉素平板(Amp-LB)自配。

1.1.3 抗生素 青霉素类:青霉素G(PEN)、氨苄西林(AMP)、苯唑西林(OXA)、阿莫西林-克拉维酸(AMC);头孢类:先锋唑啉(CFZ)、头孢曲松(CTX)、头孢噻呋(CEF);均为原药粉,由课题组统一提供。

1.1.4 分子生物学试剂 溶菌酶、2×Taq PCR Master Mix、DL2000 DNA Marker、GoldviewTMDNA染料均购自天根生化科技有限公司;DNA凝胶回收试剂盒、pMD18-T Simple Vector和感受态细胞E.coli JM109、dNT Pmixture、Taq聚合酶等购自宝生物工程(大连)有限公司;其它化学试剂均为分析纯。……