郭鹏娟,詹希美,甘 明,李卓雅,于彦杰,潘智华,张美春,何 蔼

广州管圆线虫(Angiostrongylus cantonensis,Ac)是引起嗜酸性粒细胞增多性脑膜炎或脑膜脑炎的重要病原体。幼虫侵入人体,在体内移行,最终侵犯中枢神经系统,引起广州管圆线虫病〔1〕。该病主要发生在热带和亚热带地区,近年来,随着人们饮食生活习惯的改变,该病病例呈逐年增多趋势,越来越引起人们的重视。WHO公布的21世纪新出现的全球威胁性传染病中就包括广州管圆线虫病;我国卫生部在2003年将其列为新发传染病〔2-3〕。但目前关于该病的诊断、治疗等研究仍较有限。天冬氨酸蛋白酶(Aspartic protease,ASP)是具有特征的一大类活性酶。研究证明,其在利什曼原虫、盘尾丝虫、血吸虫及疟原虫等寄生虫中,参与了重要的代谢过程,被认为是较好的诊断分子及疫苗候选靶位〔4-5〕。本试验采用PCR技术选择性的扩增ASP基因,并进行了体外原核表达,旨在为下一步利用重组蛋白研制广州管圆线虫病的诊断试剂盒及基因工程疫苗奠定基础。

1 材料和方法

1.1 试验材料

1.1.1 血清 阳性病人血清为2006年夏季北京暴发期间临床确诊广州管圆线虫病病人血清。

1.1.2 菌株质粒文库 广州管圆线虫幼虫cDNA质粒文库由本室构建。原核表达质粒pET-30a(+)及大肠杆菌BL21/DE3系本室保种。

1.1.3 主要试剂和工具酶 dNTP、ExTaq酶、T4DNA连接酶、SacⅠ、KpnⅠ酶及DNA分子量标准均购自TaKaRa公司。异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)购自BBI;蛋白质分子量标准购自 Ferment公司。质粒小提试剂盒购于Qiagen公司。采用U-gene DNA凝胶回收试剂盒。Ni-IDA Agarose购自美国Novagen公司。抗组氨酸标签单克隆抗体、辣根过氧化物酶标记的山羊抗小鼠二抗、DAB染色液均购自武汉博士德公司。……