张馨琢,黄永茂,陈 庄,钟 利,陈 枫,游春芳,邓 敏

国内各地近年来报道大肠埃希菌(Escherichia coli,E.coli)对环丙沙星(ciprofloxacin,CIP)的耐药率已超过50%,并且这些耐CIP菌株对氨基糖苷类药物(aminoglycosides,AGs)的耐药形势逐渐严峻,其耐药机制最重要的是产生氨基糖苷类修饰酶,此类酶作用于药物特定的氨基或羟基,使药物钝化,使其降低或丧失对靶位核糖体的亲和力,使细菌在药物存在的情况下仍能存活。为此本文对临床分离的耐CIP大肠埃希菌对AGs药物的耐药表型和基因型进行了相关分析,为临床合理选用AGs药物提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 菌株来源 分离自本院 2007年 7月至2008年7月非肠道感染的住院病例大肠埃希菌75株(不含同一病人同一部位感染的重复菌株),经MicroScan WalkAway-40型全自动细菌鉴定仪鉴定。大肠埃希菌质控株ATCC 25922购自国家临床检验中心。

1.1.2 主要试剂 环丙沙星、链霉素、庆大霉素、妥布霉素、卡那霉素、阿米卡星、奈替米星纸片均购自杭州天和微生物试剂公司;M-H培养基、胰大豆蛋白胨肉汤购自英国Oxiod公司;LB液体培养基购自上海生工生物技术公司;Biospin细菌基因组DNA提取试剂盒购自杭州博日科技有限公司;2×Taq PCR MasterMix试剂盒、电泳琼脂糖购自北京天根生化科技公司。

1.2 方法

1.2.1 药物敏感试验 按NCCLS推荐的纸片扩散法(Kerby-Bauer法)测定75株大肠埃希菌对环丙沙星(CIP)的耐药率,把菌株分为耐CIP组与非耐CIP组。K-B法测定2组菌株对6种AGs(链霉素、庆大霉素、妥布霉素、卡那霉素、阿米卡星、奈替米星)的耐药性。以大肠埃希菌ATCC 25922为质控菌株。结果判读参照NCCLS2006常规标准。……