孙国庆， 孙 昊， 季晨博

胃癌的早期往往无症状，提高早期胃癌及癌前病变的检出率需要内镜诊断技术的不断发展[1]。早在1966年Marston等[2]就报道使用内镜下黏膜染色作为早期胃癌诊断的辅助方法，近年来，该方法在国外受到高度重视[3]，国内也有部分报道[4-5]。黏膜染色是指应用特殊染料(如甲苯胺蓝、复方碘溶液、靛胭脂等) 对胃肠道黏膜染色,使黏膜结构更加清晰，增强病变部位与周围的对比。但目前使用的染色剂普遍存在对早期胃癌诊断缺乏特异性的问题[6]。本研究旨在研究新型胃黏膜特异染色剂对早期胃癌及癌前病变的诊断价值，为临床提供一种先进的色素内镜诊断技术。

1 对象与方法

1.1 研究对象 随机选取南京市第一医院内镜中心2007年3月至2009年3月内镜下诊断并经病理确诊的早期和进展期胃癌患者195例，其中男性114例，女性81例；年龄60～89岁，平均68.5岁。病理类型：腺癌169例，黏液癌21例，腺鳞癌3例，髓样癌2例。195例均行手术治疗。

1.2 标本采集及染色方法 为了模拟活体染色，于手术切除后立即采样，分别制成5块约2 cm×0.5 cm的组织标本，置入装有20 mL浓度分别为5%、10%、15%、20%、25%染色剂的烧杯中。染色剂为自配核染色剂，编号CTS-2009。肉眼观察染色10 s、20 s、30 s、60 s、2 min及5 min时癌组织与癌周黏膜组织的染色情况。

1.3 统计学处理 所有数据应用Epidata建库，SPSS16.0软件包分析，采用配对χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

全部标本在<15%浓度染色剂中均不着色。癌组织在≥15%浓度染色剂中均在短时间(≤30 s)内着色，60 s及以后癌周胃黏膜组织才开始着色，2 min及5 min时观察标本，整体虽然呈深浅不一着色情况，但癌组织与癌周胃黏膜组织边界不易区分。从显色时间上看癌组织的染色时间明显早于癌周胃黏膜，P<0.01。

观察中发现超过半数的腺癌、黏液癌、腺鳞癌组织在染色剂浓度为15%时就有显著着色，而髓样癌组织在20%浓度时才着色(详见表1)，可见胃癌病理类型不同所需染色剂的浓度略有区别。

表1 不同病理类型胃癌在不同浓度染色剂下的 染色情况[例数(%)]

在对不同染色时间的观察中还发现，不同病理类型所需染色时间也略有不同(见表2)，从构成比图(图1)上可以清晰看出94.36%的癌组织完成染色在15～20 s，98%的腺癌(高分化型)组织在染色15～25 s后显示为红色(图2)。

表2 不同病理类型胃癌在不同染色时间的 染色情况[例数(%)]

图1 不同病理类型胃癌在不同染色时间点染色构成比

图2 腺癌标本染色浓度时间三维图

3 讨论

色素内镜学说是1966年由日本学者Yamakawa创立，至20世纪末期，在染料选择、显色的生物学基础及临床应用方面都取得很大发展，近年来国内也逐渐地应用于临床，对早期胃癌和癌前病变的发现有着重大意义[7-8]。但因为此前研究的相关染料大多为非特异性地与癌组织结合，仅依靠改变胃癌组织存在处的凸起或凹陷使色素堆积的多寡而表现出色相的深浅[9]。因此，难以在临床上广泛开展。

我们依据胃肿瘤生物学的特点，即肿瘤细胞核染色体均为异倍体，且从正常细胞到肠化、不典型增生(上皮内瘤变)再到癌细胞其DNA含量逐渐增高的特征[10]，在核染色剂的配方中寻找到能与癌组织特异快速结合并显色的染色剂。通过前期核染色剂的预实验，自配出编号为CTS-2009的核染色剂，并应用于195例标本中。结果显示，全部标本的癌组织均能在一定浓度(15%～25%)、短时间内(≤30 s)染色，而癌周胃黏膜组织60 s及以后才开始着色，在显色时间上癌组织的染色时间明显早于癌周胃黏膜，两者比较差异有统计学意义(P<0.01)，这提示此染色剂用于色素胃镜诊断早期胃癌的可能性。自配染色剂经药理实验后，将进一步开展体内试验，为临床色素内镜诊断早期胃癌的临床实验做开创性的基础工作。

本实验在比较癌组织与癌周胃黏膜组织染色的同时也考虑到不同病理类型癌组织之间可能的差异性，增加不同类型肿瘤之间的比较，也是为了更准确地确定最佳的染色时间和浓度，以达到最佳的敏感度和特异度。通过腺癌标本染色时间浓度三维图像可以看出98%的腺癌(高分化型)在15%～20%浓度下，短时间内(≤25 s)及以后时间内显示不同色差，有统计学意义(P<0.01)。低分化的黏液癌、腺鳞癌、髓样癌的标本均表现为在浓度加大(20%～25%)、时间延长(25 s及以后)才逐渐显色，与腺癌标本的着色存在一定差异。可能是这些癌组织细胞结构与腺癌存在差异所致，但由于标本较少，缺乏统计学意义，仅显现此染色剂在短时间内，一定浓度下可以特异染色多种肿瘤组织，不同肿瘤组织存在上色时间和染色剂浓度的区别，均明显区别于癌周组织。经过分析我们大致确立了一个适合不同肿瘤组织的时间和浓度，为今后的进一步研究提供了重要参考。

[1] Kondo K. Duodenogastric reflux and gastric stump carcinoma[J].Gastric Cancer，2002，5(1):16-22.

[2] Marston A, Pheils MT, Thomas ML, et al. Ischemic colitis[J]. Gut, 1966, 7(1):1-15.

[3] Otsuka Y,Niwa Y,Ohmiya N,et al. Usefulness of magnifying endoscopy in the diagnosis of early gastric cancer[J].Endoscopy,2004,36(2): 165-169.

[4] 朱建新.应用染色内镜和放大内镜提高内镜诊断水平[J].中华消化内镜杂志,2003,20 (1) :7-8.

[5] 张正坤.经内镜美蓝染色对早期胃癌的诊断价值[J].临床消化病杂志,2000，12(1)： 16.

[6] Yagi K,Nakamura A,Sekine A.Accuracy of magnifying endoscopy with methylene blue in the diagonosis of specialized intestinal metaplasia and short-segment Barrett's esophagus in Japanese patients without Helicobacter pylori infection[J].Gastrointest Endosc,2003,58 (2):189-195.

[7] 徐雷鸣，陈惠芳，李定国. 对照比较放大染色胃镜与普通胃镜检查对胃癌及癌前病变的诊断价值[J].中国内镜杂志,2005,11(2):119-121.

[8] Areia M, Amaro P, Dinis RM, et al. External validation of a classification for methylene blue magnification chromoendoscopy in premalignant gastric lesions[J]. Gastrointest Endosc, 2008, 67(7):1011-1018.

[9] 杨辉，刘国卓，陈绍斌，等. 早期胃癌及癌前病变与内镜下美蓝染色图像和组织学的关系[J].临床消化病杂志，2006,18(3):180.

[10] 陈磊，房殿春，李向红，等.放大色素内镜诊断早期胃癌及其癌前病变[J].解放军医学杂志，2005, 30(9): 807-809.