王 琪 季小忠

江苏省海安市人民医院(226600)

多巢囊肿综合征(PCOS)疾病进展中，患者的排卵障碍以及较高雄激素水平是该病重要危险因素[1]；此外机体的慢性低度非特异性炎性反应也是疾病进展的重要原因。NK细胞作为优质细胞群，通过调控炎性反应而参与PCOS进展[2]。辅助性Th1及Th2细胞的动态平衡对机体维持正常细胞及体液免疫有重要意义。妊娠状态下，Th1细胞显著被抑制、Th2细胞表达较高，当机体Th1细胞较高表达时不良妊娠结局升高。细胞毒性T细胞(CD8+Tc)可通过对靶细胞的释放扩大免疫效能[3]。本研究分析PCOS不孕症患者血液中NK细胞、CD8+Tc细胞和Th1/Th2水平与性激素水平关系，为临床有关机理研究提供参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料

以2018年2月-2019年12月本院治疗的PCOS不孕症患者70例为PCOS组。纳入标准：①符合PCOS诊断标准[4]；②表现为显著的稀发型排卵或不排卵；③超声检查发现患者单侧或双侧卵巢有直径2～9mm卵泡≥12个；④3个月内均未服用避孕药物；⑤排除自身免疫性疾病、肿瘤以及库欣综合征。另选体检正常排卵女性70例为对照组。所有纳入对象均知情同意，本研究经伦理委员会论证。

1.2 检测方法

1.2.1细胞因子取静脉血样100μl使用RPMI-1640培养液100μl稀释后加入96孔平板中，使用PMA工作液及离子霉素工作液、莫能霉素工作液混合后，在 5% CO2培养箱中培养5h，弃上清液，向上述液体加入CD4-FITC 单克隆抗体10μl。避光保存15min，使用磷酸缓冲液(PBS)清洗，再次使用破膜剂，避光保存15min， PBS液清洗。使用流式细胞仪进行NK细胞、CD8+Tc细胞和Th1/Th2水平检测。

1.2.2性激素均于月经第3～5天空腹采血，月经稀疏甚至闭经者根据患者以往规律月经情况，预测其月经期采血。使用电化学发光免疫法检测血清黄体生成素(LH)、睾酮(T)、促卵泡激素(FSH)、雌二醇(E2)、孕酮(P)。

1.3 观察指标

两组NK细胞、CD8+Tc细胞和Th1/Th2水平，LH、T、FSH、E2、P水平比较。采用spearman相关性分析，对NK细胞、CD8+Tc细胞和Th1/Th2水平与LH、T、FSH、E2、P水平相关性进行分析。

1.4 统计学方法

2 结果

2.1 一般临床资料

PCOS组原发性不孕62例，继发性不孕8例，年龄(27.7±2.7岁)与对照组(28.0±3.1岁)无差异(t=0.554，P=0.580)，体重指数(26.6±3.1 kg/m2)高于对照组(24.3±2.3 kg/m2)(t=4.987，P=0.000)。

2.2 NK细胞、CD8+Tc细胞和Th1/Th2水平

PCOS组NK细胞和Th1/Th2水平高于对照组，CD8+Tc细胞水平低于对照组(P<0.05)。见表1。

表1 两组NK细胞、CD8+Tc细胞和Th1/Th2水平比较

2.3 性激素水平

两组FSH、T水平无差异(P>0.05)，PCOS组LH水平高于对照组，E2、P低于对照组(P<0.05)。见表2。

表2 两组性激素水平比较

2.4 相关性分析

通过相关性分析，PCOS组NK细胞、CD8+Tc细胞和Th1/Th2分别与LH、T呈正相关，与E2、P呈负相关(P<0.05)。见表3。

表3 PCOS患者细胞因子与性激素水平的相关性分析

3 讨论

较高的雄激素水平可通过使机体内分泌功能失衡而影响卵巢多囊改变以及卵泡发育[5]。随着PCOS疾病进展极易造成患者月经失调以及不孕。目前对于PCOS疾病的研究仍处于探索阶段[6]，较成熟的机制主要包括非遗传性理论以及遗传性理论[7]。非遗传性理论研究认为[8]，机体子宫内部激素水平可能会对胎儿成年后的内分泌状态造成影响，随着子宫内部雄激素水平升高，在胎儿青春期及成年后可能造成排卵功能障碍而不孕。而遗传理论认为，PCOS具有显著的家族遗传性，在机体X染色体中连锁隐形遗传以及常染色体显性遗传，均会造成下一代患PCOS病风险升高[8]。随着研究的不断深入，越来越多的研究显示炎性反应对PCOS疾病进展发挥重要作用，炎症反应可能通过影响患者下丘脑-垂体性腺轴功能紊乱影响卵泡发育[9]。

NK细胞是机体重要的免疫细胞，主要通过超敏反应及自身免疫性反应参与免疫反应过程，在此过程中NK细胞不需要抗原的致敏性就可以发生自发性杀伤作用。本研究中，PCOS组NK细胞水平显著升高，提示局部炎性反应处于较高水平，而PCOS患者性激素水平紊乱显著。在正常机体中，性激素对性器官的成熟以副性征的发育有重要意义，同时对机体的细胞免疫功能也有显著调节功能[10]。在本研究中，PCOS组LH、T水平显著高于对照组，E2、P低于对照组，提示性激素水平紊乱对NK细胞活性有一定作用。

CD8+Tc细胞水平下调，提示机体T细胞功能受到抑制[11]。有研究认为[12]，PCOS处于慢性低炎症状态，同时排卵过程中也存在多种免疫活性细胞的调节作用。陈创奇等[13]在对多种T细胞亚群对于疾病进展的研究中发现，CD8+Tc细胞水平的下调对于疾病进展有重要意义，与本研究相互印证。

另外，本研究通过与对照组比较，PCOS组Th1/Th2水平升高。在正常机体免疫过程中，性激素与免疫反应相互调节，同时相比男性而言女性体液以及细胞免疫活跃程度升高，对此类差异的重要因素则为雄激素水平[14]。雄激素可直接作用于T细胞，通过对细胞因子以及淋巴细胞活性的调节作用直接影响下丘脑-垂体性腺轴，改善机体对免疫应答的反应水平，而雌激素对于免疫应答水平有显著抑制性效应。国外研究已经证实[15]，睾酮可通过对Th2显著性抑制作用，促进Th细胞向Th1细胞转换，根据本研究结果分析提示，在PCOS疾病进展中，性激素水平的失衡可能是造成机体免疫功能异常的重要原因。

综上所述，NK细胞、CD8+Tc细胞和Th1/Th2水平与PCOS不孕症患者性激素水平紊乱有关，性激素水平紊乱以及免疫功能失衡可能是造成患者不孕的重要原因之一。