刘维帅，郭晓宁，杨 洋，张娟娣

陕西省杨凌示范区医院病理科(杨凌 712100)

胃癌发病初期无特异性临床症状，且缺乏早期胃癌临床诊断的特异性标志物，因此大多数患者在确诊时该病已发展至中晚期。胃癌的恶性程度与其病理分型有关，影响患者预后的情况[1]。胃癌患者的临床诊断多采用影像学联合血清检测。对早期胃癌患者，影像学检查可能无法探测到患者病变灶，导致出现漏诊或误诊。毛智军等研究发现，TAP可检测早期胃癌的筛查、诊断及术后复发转移[2]。而发病初期患者血清会出现相关指标的变化，基于此，通过对胃癌患者相关血清相关指标进行检测，有助于临床医师了解患者疾病发展近况[3]。王延峰等研究发现，蛋白组学可诊断早期消化道的恶性肿瘤[4]。重组人DIckkopf相关蛋白1(DKK-1)对Wnt信号通路起拮抗作用。肿瘤增殖及分化的重要原因为Wnt信号通路活化，因此在胃癌的发生及发展过程中可能会有DKK-1参与[5]。miRNA在肿瘤的发生及发展中具有促癌或抑癌的作用[6]。DKK-1在肿瘤的发生及发展中通过活化免疫抑制肿瘤细胞的产生[7]。为探讨血清DKK-1与miR-133a水平与胃癌患者病理分型及预后之间的关系，本研究通过对我院收治的胃癌患者病理分型、病理分期及有无转移等情况进行分析。

资料与方法

1 一般资料 收集2016年5月至2017年5月经我院病理检查确诊为胃癌患者84例，其中男性43例,女性41例,年龄43～68岁,平均年龄(56.8±2.3)岁；体质量指数18.4～25.7 kg/m2，平均(22.4±2.1) kg/m2。TNM分期：Ⅰ期12例，Ⅱ期26例，Ⅲ期28例，Ⅳ期18例。淋巴结转移情况：经淋巴结穿刺活检检查显示存在淋巴结转移患者47例，无淋巴结转移患者37例。细胞分化程度：低分化26例，中分化26例，高分化32例。病理分型：腺鳞癌29例，黏液腺癌25例，低分化腺癌19例，乳头状腺癌11例。纳入与排除标准见表1。本次研究已获得伦理委员会批准。入组患者对于本次研究内容知情并同意。

表1 病例纳入与排除标准

2 研究方法

2.1 胃癌患者组织在胃镜活检时获得，并根据其病理分型、有无转移、病理分期以及细胞分化程度进行分组。

2.2 抽取胃癌患者空腹上肢静脉血，使用离心机对采取的血样本进行离心，3500 r/min离心10 min后取血清于无菌EP管中，待测定胃癌患者血清中相关指标。采用全自动生化分析仪(AU5800系列全自动生化分析系统，贝克曼库尔特有限公司)，利用酶联免疫吸附法对患者重组人DIckkopf相关蛋白1(DKK-1)水平进行检测。miR-133a检测采用流式细胞仪[Attune NxT流式细胞仪，赛默飞世尔科技(中国)有限公司]，按照产品说明书提取RNA，以U6作为内参，qPCR检测血清中miR-133a的表达水平，结果采用2-ΔΔct法进行相对定量分析。本次研究所使用试剂盒均购于上海酶联生物有限公司，且操作严格按照试剂盒说明步骤进行。

3 观察指标 入组胃癌患者不同病理类型、病理分期、有无淋巴转移、不同分化程度、不同预后结局中miR-133a、DKK-1水平。患者预后评估进行为期2年随访，记录该期间内死亡患者数及存活数。

结 果

1 不同胃癌患者病理类型中DKK-1与miR-133a水平的表达分析 由表2 可知，胃癌不同病理类型患者中的miR-133a与DKK-1水平表达存在差异，其中腺鳞癌的miR-133a水平最低、DKK-1水平最高，乳头状腺癌的miR-133a最高、DKK-1最低，miR-133a在乳头状腺癌、黏液腺癌、低分化腺癌及腺鳞癌患者中显著下降(P<0.05)，DKK-1在乳头状腺癌、黏液腺癌、低分化腺癌及腺鳞癌患者中显著上升(P<0.05)。上述结果表明，胃癌患者不同的病理分型影响DKK-1与miR-133a的表达，即DKK-1水平在腺鳞癌最高、乳头状腺癌最低，miR-133a水平在乳头状腺癌最高、腺鳞癌最低。

表2 DKK-1与miR-133a在胃癌患者不同病理类型中的表达情况对比(μg/L)

2 DKK-1与miR-133a在胃癌患者不同病理分期中的表达情况分析 由表3可知，DKK-1与miR-133a在不同胃癌患者病理分期中的表达存在差异，其中TNM分期Ⅳ期DKK-1水平最高、miR-133a水平最低，TNM分期Ⅰ期DKK-1水平最低、miR-133a水平最高，DKK-1水平随TNM分期增强而显著上升(P<0.05)，miR-133a水平随TNM分期增强显著下降(P<0.05)。上述结果表明，胃癌患者不同病理分期影响DKK-1与miR-133a的表达，即DKK-1水平在TNM分期Ⅳ期中最高、Ⅰ期中最低，miR-133a水平在TNM分期Ⅳ期中最低、Ⅰ期中最高。

表3 DKK-1及miR-133a在胃癌患者不同病理分期中的表达情况对比(μg/L)

3 DKK-1与miR-133a在有无淋巴结转移胃癌患者中的表达情况分析 由表4可知，DKK-1与miR-133a在有无淋巴结转移胃癌患者中的表达存在差异，淋巴结转移胃癌患者DKK-1水平显著高于无淋巴结转移胃癌患者(P<0.05)，无淋巴结转移胃癌患者miR-133a水平显著低于淋巴结转移的胃癌患者(P<0.05)。上述结果表明，胃癌患者中淋巴结有无转移影响DKK-1与miR-133a水平的表达，DKK-1水平在无淋巴转移的胃癌患者中的水平较高，miR-133a水平在淋巴结转移的胃癌患者中较高。

表4 DKK-1与miR-133a在有无淋巴结转移胃癌患者中的表达情况对比(μg/L)

4 DKK-1与miR-133a在不同分化程度胃癌患者中的表达情况分析 由表5可知，DKK-1及miR-133a水平在不同细胞分化胃癌患者中的表达存在差异，其中低分化DKK-1水平最高、miR-133a水平最低，高分化DKK-1水平最低、miR-133a水平最高，DKK-1水平随T细胞分化程度增强而显著下降(P<0.05)，miR-133a水平随细胞分化程度增强显著上升(P<0.05)。上述结果表明，胃癌患者不同细胞分化影响DKK-1与miR-133a表达水平，DKK-1水平在低分化度中最高，miR-133a水平在高分化度中最高。

表5 DKK-1以及miR-133a在不同分化程度胃癌患者中的表达情况对比(μg/L)

5 DKK-1与miR-133a在有无淋巴结转移的胃癌患者中表达情况分析 由表6可知，DKK-1与miR-133a在胃癌患者不同预后结局中的表达存在差异，胃癌死亡患者DKK-1水平显著高于存活超过2年的患者(P<0.05)，胃癌死亡患者miR-133a水平显著低于存活超过2年时间的胃癌患者(P<0.05)。上述结果表明，无淋巴结转移胃癌患者预后结局影响DKK-1与miR-133a的表达水平，胃癌死亡患者DKK-1水平较高、miR-133a水平较低。

表6 DKK-1及miR-133a在有无淋巴结转移胃癌患者中的表达情况对比(μg/L)

讨 论

临床资料数据统计表明，我国胃癌的发病率及死亡率居高不下，严重威胁人类的生命安全及健康[9]。Owen 等研究表明，不同的胃癌病理类型患者及其预后情况存在明显差异[10]。影响胃癌患者恶性程度的重要影响因素主要有胃癌患者细胞分化程度、肿瘤病理类型、肿瘤分期及有无淋巴结转移[11]。常青等研究发现，TNM分期、肿瘤分化度、淋巴转移等影响胃癌术后预后[12]。因此，本研究分析了影响胃癌患者血清中miR-133a、DKK-1水平的因素，其水平的高低与胃癌患者的病理分期、病理分型、有无转移及细胞分化程度之间密切相关，为今后胃癌临床的初期诊断及应用提供一定的理论与技术支撑。

Wnt信号通路活化可促进肿瘤细胞的增殖及分化，而DKK-1是肿瘤生产微环境中的一项重要标志物[13]，可以有效地抑制Wnt通路。DKK-1在正常组织中的表达水平较低，在恶性肿瘤组织患者血清中DKK-1高量表达。DKK-1参与肿瘤细胞的生长、浸润及转移等过程[14]，通过自分泌或旁分泌等方式DKK-1可激活多种信号通路。本次研究结果显示，DKK-1在不同的胃癌病理分型、病理分期、细胞分化及淋巴结转移中表达水平不一。临床通过患者血清DKK-1水平进行检测的方式对肿瘤浸润、增长等情况进行初步判断[15]。

miRNA可以通过种子序列对特异性的mRNA序列进行识别，并在转录后水平通过促进目标miRNA的降解或抑制翻译发挥负调控基因表达的生物学作用，在细胞分化、增值、凋亡及应激反应中发挥着非常重要的作用，且miRNA作为癌基因或抑癌基因均有参与癌症发生及发展过程。miRNA异常表达会促进癌症的发生和发展，miR-133a属于miR-133家族，有研究表明miR-133a在人及小鼠的心肌、骨骼细胞中可高量表达，在食管癌患者中miR-133a表达明显降低，且与患者病理分期以及肿瘤大小密切相关，可将其作为预后评估指标[16]。本次研究结果表明，在不同病理类型、病理分期、分化程度、有无淋巴结转移以及患者生存情况方面均有表达差异，且患者病理分期等级越高，分化程度越低，伴有淋巴结以及患者死亡情况时miR-133a水平越低。

综上所述，患者血清中DKK-1、miR-133a水平含量与患者胃癌分期、病理分型、有无转移以及细胞分化程度之间有着密切联系，可以通过检测血清中miR-133a、DKK-1水平对胃癌患者疾病情况进行初步诊断及评估。