丁丽燕

摘 要 目的：开展干扰试验研究，确定丙泊酚中/长链脂肪乳注射液细菌内毒素的检查方法。方法：按中国药典2015年版细菌内毒素检查法第一法（凝胶法），对3批产品进行细菌内毒素干扰试验。结果：丙泊酚中/长链脂肪乳注射液稀释至105.6倍时，对细菌内毒素检查法无干扰作用。经检测，3批产品的细菌内毒素均符合要求。结论：凝胶法可用于丙泊酚中/长链脂肪乳注射液的细菌内毒素检查，并可为细菌内毒素检查的干扰试验提供数据支持。

关键词 丙泊酚中/长链脂肪乳注射液 细菌内毒素 干扰试验

中图分类号：R927.12； R971.2 文献标志码：A 文章编号：1006-1533（2020）01-0070-04

Interference study of bacterial endotoxin test in propofol injection

DING Liyan*（Shanghai Joy Biopharm CO.， LTD.， Shanghai Engineering Research Center of Lipid Emulsion， Shanghai 201203， China）

ABSTRACT Objective： To study the interference of bacterial endotoxin test in propofol medium and long chain fat emulsion injection and establish a method for bacterial endotoxin test. Methods： The inference of bacterial endotoxin test in 3 batches of products were determined based on the Chinese Pharmacopoeia （2015 edition） . Results： Propofol medium and long chain fat emulsion injection did not interfere with the bacterial endotoxin test when it was diluted to 105.6 folds with bacterial endotoxin water. The bacterial endotoxin in the 3 batches of products met the requirements after determination. Conclusion： Gelation assay can be used for detecting the bacterial endotoxin in propofol medium and long chain fat emulsion injection and can provide data support for interference tests of bacterial endotoxin inspection.

KEy WORDS propofol medium and long chain fat emulsion injection； bacterial endotoxins； interference test

丙泊酚（2，6-二異丙基苯酚），作为一种静脉麻醉药，以其起效迅速、作用时间短、清醒快、易于控制和不良反应少等特点，被麻醉医师广泛用于全麻诱导，硬膜外麻醉辅助镇静，无痛人流，无痛胃镜等领域。其术后恶心、呕吐率低等优点，进一步奠定其门诊手术首选全麻药物的地位[1-2]。在腹腔镜、宫腔镜等短小手术的应用中，其麻醉深度的良好控制性和苏醒迅速、平稳已被广泛认同。丙泊酚具有降低颅内压，脑代谢，抗氧化作用，广泛应用于神经外科麻醉[3-4]。

含药静脉注射用脂肪乳剂中，大部分药物分布在油相或油水界面，避免与水直接接触。对于易水解或对水敏感的药物，这种隔离起到了增加稳定性的作用。静脉注射用脂肪乳剂不含或仅含少量有机溶剂，对血管刺激性较小；同时，外水相中药物较少，可有效降低由药物引起静脉炎的可能，增强患者的顺应性；另外，静脉注射用脂肪乳剂具有一定的靶向性，可降低非靶区药物的浓度。丙泊酚中/长链脂肪乳注射液游离药物浓度和注射疼痛发生率较长链脂肪乳显著降低，且在长期输注过程中不易引起高脂症的发生，还可减轻肝脏负担，更适用于肺功能不全的患者和婴幼儿麻醉，是目前市场上最安全有效的丙泊酚制剂[5-6]。

目前法定的热原检查方法有家兔热原检查法和细菌内毒素检查法。家兔法存在操作繁琐、重复性差、灵敏度低、费时等缺点，而细菌内毒素检查法操作简单，灵敏度高，干扰少，速度快[7]。美国药典20版（USPXX）第一次收载细菌内毒素检查法（bacterial endotoxin test， BET），随后英、德、意、日以及中国相继在药典中收载BET法。《中国药典》2005年版BET法检查品种增至168个，《中国药典》2010年版又新增修订品种达112种，《中国药典》2015年版BET法检查品种增至631种。可见用细菌内毒素检查法替代家兔热原检查法是一种趋势。本文参照《中国药典》2015年版四部“细菌内毒素检查法”[8]和相关文献，通过试验研究，建立了一种可用于丙泊酚中长链脂肪乳中细菌内毒素检查的方法。

1 仪器与试药

1.1 仪器

HH·W21·600电热恒温水温箱（上海跃进医疗器械厂）、XW-80A旋涡混合器（上海医大仪器有限公司）、SW-CJ-1FD（苏州净化设备有限公司），试验所用玻璃器皿均在250 ℃烘烤2 h，以去除可能存在的外源性细菌内毒素。

1.2 试药

鲎试剂（TAL，湛江安度斯生物有限公司，灵敏度0.25 EU/ml、0.03 EU/ml）；细菌内毒素工作标准品（CSE，湛江安度斯生物有限公司，10 EU/支）；细菌内毒素检查用水（BET水，湛江安度斯生物有限公司，5 ml/支）；丙泊酚中/长链脂肪乳注射液（上海乔源生物制药有限公司，20 ml∶200 mg，批号：BZA171001A、BZA171002A、BZA171003A）。

1.3 方法

1.3.1 干扰初筛试验

1）供试品限值 丙泊酚中/长链脂肪乳注射液细菌内毒素限值L= K/M=5/15=0.33 EU/mg。式中，K为人每千克体重每小时最大可接受的内毒素剂量，以EU/（kg·h）表示，注射剂K=5 EU/（kg·h）；M为人用每千克体重每小时的最大供试品剂量，以mg/（kg·h）表示，根据丙泊酚中/长链脂肪乳注射液原研产品（B. Braun Melsungen Ag）的说明书，M=15 mg/（kg·h）。

2）最大有效稀释倍数（MVD） MVD=CL/λ，C为供试品溶液的浓度，丙泊酚中/长链脂肪乳注射液浓度为10 mg/ml，L=0.33 EU/mg。当灵敏度λ为0.5、0.25、0.125、0.06、0.03 EU/ml时，所对应的MVD分别为6.6、13.2、26.4、52.8、105.6倍。

1.3.2 干扰预试验

取批号为BZA171002A的供试品，用BET水分别稀释至6.6、13.2、26.4、52.8、105.6倍的系列溶液，作为供试品阴性对照（A）。另制备同样倍数的供试品系列溶液，分别加入含有2λ（λ：0.25 EU/ml）的细菌内毒素，作为供试品阳性对照（B）。设立阳性对照（C）管和阴性对照（D）管。每个浓度平行做两管，加入鲎试剂反应管，（37±1）℃反应（60±2）min。

1.3.3 干扰试验

根据干扰初筛试验的结果，选择第二个出现阳性结果的供试品浓度作为干扰试验（一般不选择第一个出现阳性结果的供试品浓度作为干扰试验）。用细菌内毒素检查用水分别将供试品溶液稀释至第二个出现阳性结果的供试品浓度（A），平行做2管（A）。用A溶液将细菌内毒素工作标准品稀释成含2λ、1λ、0.5λ、0.25λ（λ：0.03 EU/ml的系列溶液，及每个浓度（B）。用细菌内毒素检查用水将细菌内毒素工作标准品稀释成含2λ、1λ、0.5λ、0.25λ的系列溶液，及每个浓度平行做4管（C）。另设立阴性对照（D），平行做两管。

2 结果

2.1 干扰预试验

结果显示，溶液A、D均为阴性；溶液C均为阳性，试验有效；溶液B系列中，本试验中样品的无干扰浓度为≥S52.8（表1）。第二个出现阳性结果的供试品浓度为S105.6，选择S105.6作干扰试验。

2.2 干扰试验

干扰试验结果显示，供试品溶液和内毒素检查用水分别作为供试品阴性对照和阴性对照，结果均为阴性，ES=0.03，在0.5λ

2.3 丙泊酚中/长脂肪乳注射液细菌内毒素检查

取3批产品，使用λ为0.03 EU/ml的鲎试剂，参照《中国药典》2015年版第四部1143细菌内毒素检查法第一法（凝胶法）依法检查[8]。结果显示，A和D均为阴性；B和C均为阳性，试验有效（表3）。表明这3批产品的细菌内毒素检查均符合规定。

3 讨论

细菌内毒素检查法具有操作简单、迅速且灵敏度高的特点，适用于注射剂生产过程中的热原控制和家兔法不能检测的某些细胞毒性药物制剂。但它的试验结果会受到鲎试剂、生产工艺、处方配比、试验环境或供试品稀释方式等多种因素的影响而发生变化，不同厂家的相同品种对其细菌内毒素检查所产生的干扰情况也存在较大的差别，因此，进行干扰试验是必要的[9-11]。本研究仅对一个厂家的鲎试剂和细菌内毒素工作标准品、特定生产工艺的产品、供试品稀释方式等因素进行了干扰试验，建议对不同厂家鲎试剂和细菌内毒素工作标准品、不同厂家的相同品种进行细菌内毒性检测前都需进行干扰试验，以获得更准确、更可靠的试验结果，保障产品的安全。

本研究采用灵敏度为0.03 EU/ml的鲎试剂，对3批丙泊酚中长链脂肪乳注射液进行试验。从干扰试验可知，Et/Es在0.5～2之间，稀释105.6倍的丙泊酚中/长链脂肪乳注射液对细菌内毒素检查没有干扰，表明此法可行。

参考文獻

[1] 阮玉芬， 邓淦奇. 丙泊酚中长链脂肪乳注射液应用于无痛人工流产中的临床效果[J]. 中国现代药物应用， 2018， 12（10）： 135-137.

[2] 李敏. 丙泊酚中/长链脂肪乳注射液在全凭静脉麻醉中的有效性和安全性分析[J]. 中国临床医学， 2012， 19（6）： 679-681.

[3] 高洁. 丙泊酚脂肪乳的制备工艺及质量控制研究[D]. 武汉： 华中科技大学， 2008.

[4] 甘美勤， 雷雯淇. 丙泊酚诱导麻醉后给予舒芬太尼在脑功能区手术唤醒麻醉中的作用[J]. 中国实用神经疾病杂志， 2019， 22（16）： 98-104.

[5] 郑立春， 黄世校， 陈文东， 等. 丙泊酚中长链脂肪乳注射液在无痛人流术患者中的疗效及对VAS评分的影响[J].今日药学， 2018， 28（10）： 42-44.

[6] 王静， 李晓红. 丙泊酚中长链脂肪乳在婴幼儿麻醉中的应用效果观察[J]. 蚌埠医学院学报， 2018， 43（3）： 18-21.

[7] 郑霞， 赵毓梅. 细菌内毒素检查法的应用进展[J]. 中国热带医学， 2009， 9（1）： 170-171； 20.

[8] 国家药典委员会. 中华人民共和国药典2015年版四部[M]. 北京： 中国医药科技出版社， 2015： 附录99-100.

[9] 周彬， 臧晓红， 顾佳. 丙泊酚原料药细菌内毒素检查方法的验证[J]. 食品与药品， 2016， 18（5）： 39-43.

[10] 罗丽萍， 王宗春， 郭咸希. 鲎试剂方法检测丙泊酚注射液中细菌内毒素的可行性研究[J]. 湖北中医药大学学报， 2011， 13（3）： 41-43.

[11] 吴志， 张仁剑， 闫明， 等. 丙泊酚注射液细菌内毒素检查法研究[J]. 中国医药导报， 2012， 9（6）： 42-43.