（义乌市中心医院 病理科，浙江 义乌322000）

胃癌是胃黏膜上皮发生的恶性肿瘤，预后较差，对患者的生命健康造成严重威胁。近年来，随着胃癌诊疗技术的不断提高，胃癌的预后改善明显，但胃癌早期诊断率比较低，使部分胃癌患者未能得到及时诊治，导致胃癌的生存率不容乐观[1]。探索影响胃癌发生、发展的标志物，并对其进行调控和干预，对早期防治胃癌和改善患者预后具有重要意义。MicroRNA（miRNA）在动植物中广泛存在，可与mRNA特异性结合发挥转录后调控作用；miRNA在恶性肿瘤的发生、发展中具有重要作用[2-3]。miR-144-3p为miRNA的一种，在多种恶性肿瘤中呈低表达，其与恶性肿瘤细胞的增殖、凋亡、迁移及侵袭等关系密切[4-5]。本文对胃癌组织中miR-144-3p水平进行研究，探讨其与临床病理特点和预后的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2011年1月—2013年12月在义乌市中心医院进行手术切除的100例胃癌患者的胃癌组织及其癌旁组织标本。其中，男性59例，女性41例；年龄（63.24±5.26）岁；临床分期：Ⅰ期32例，Ⅱ期24例，Ⅲ其33例，Ⅳ期11例；有淋巴结转移49例，无淋巴结转移51例；低分化28例，中分化38例，高分化34例。纳入标准：①经病理证实为胃癌；②手术前未进行放化疗及其他治疗；③患者签署知情同意书。排除标准：①合并其他恶性肿瘤；②重要脏器功能不全；③围手术期死亡；④术后无法接受随访及中途退出；⑤临床资料及随访资料不全。本研究通过医院伦理委员会批准。

1.2 方法

胃癌组织和癌旁组织中miR-144-3p水平测定：取患者胃癌组织及癌旁组织标本（距离肿瘤组织边缘≥5 cm），置于冰上用生理盐水冲洗干净，取部分组织标本在冰上研磨提取总RNA，测定总RNA的完整性和浓度。取总RNA 1μg逆转录为cDNA，采用实时荧光定量聚合酶链反应（quantitative real-time polymerase chain reaction, qRT-PCR）测定组织中miR-144-3p水平。以U6为内参照，qTR-PCR反应条件：56℃预变性2 min，95℃变性 10 min，95℃退火 15 s，60℃延伸 60 s，共42个循环，用2-ΔΔCT法计算miR-144-3p相对表达量。Hsa-miR-144-3p正向引物：5'-ACACTCCAGCTG GGTACAGTATAGATGATGTA-3'，长度32 bp；反向引物 ：5'-CTCAACTGGTGTCGTGGA-3'，长度 18 bp。U6反向引物：5'-CTGCTTCGGCAGCACA-3'，长度16 bp；反向引物：5'-TGGTGTCGTGGAGTCG-3'，长度16 bp。miR-144-3p引物及PCR试剂盒购自美国ABI公司。

1.3 随访

胃癌患者术后通过电话或门诊随访，随访时间从手术时间开始至术后死亡时间或截止时间，截至时间为2018年12月31日。

1.4 统计学方法

数据分析采用SPSS 20.0统计软件。计量资料以均数±标准差（±s）表示，比较用t检验；Kaplan-Meier法绘制生存曲线，比较用Log-rank χ2检验；影响因素的分析采用Cox比例风险模型，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 胃癌组织和癌旁组织中miR-144-3p水平比较

胃癌组织与癌旁组织中miR-144-3p分别为（0.53±0.12）和（1.00±0.11），经t检验，差异有统计学意义（t=28.872，P=0.000）；胃癌组织中miR-144-3p水平低于癌旁组织。见图1。

2.2 胃癌组织中miR-144-3p水平与胃癌临床病理特点的关系

不同临床分期、淋巴结转移及分化程度胃癌组织中miR-144-3p水平比较，经t检验，差异均有统计学意义（P＜0.05）；Ⅲ和Ⅳ期、有淋巴结转移、中和低分化胃癌组织中miR-144-3p水平低于Ⅰ和Ⅱ期、无淋巴结转移及高分化胃癌组织（P＜0.05）。不同年龄和性别胃癌患者miR-144-3p水平比较，经t检验，差异无统计学意义（P＞0.05）。见表1。

2.3 胃癌组织中miR-144-3p水平与胃癌预后的关系

100例患者术后随访5年，以miR-144-3p在胃癌组织中水平的中位数为界，分为低表达46例和高表达54例。miR-144-3p高表达者5年总生存率和无病生存率分别高于低表达者（77.8% VS 52.2%）（68.5%VS 45.7%）。miR-144-3p高表达者与低表达者5年总生存率和无病生存率比较，经χ2检验，差异有统计学意义（χ2=7.257和5.332，P=0.007和0.021）。见图2、3。

2.4 影响胃癌预后因素的Cox比例风险模型分析

以胃癌组织miR-144-3p表达、年龄、性别、临床分期、淋巴结转移及分化程度为自变量进行胃癌预后的Cox多因素分析，结果显示：miR-144-3p低表达、临床分期、淋巴结转移及分化程度为影响胃癌预后的独立危险因素（P＜0.05）。见表2。

图2 胃癌组织中miR-144-3p高低表达患者生存曲线

图3 胃癌组织中miR-144-3p高低表达患者5年无病生存率

表2 影响胃癌预后因素的多因素Cox风险模型参数

3 讨论

胃癌作为消化系统常见的恶性肿瘤，早期症状缺乏特异性，致使大多数患者确诊时已为中晚期，严重影响患者的预后。随着外科手术水平和放化疗技术的不断提高，胃癌的预后得到一定改善，但仍具有易转移、高复发及预后差等恶性生物学特点[6-7]。因此，探索胃癌的早期诊断和预后标志物具有重要意义。

miRNA是在真核生物体内广泛存在的一种微小RNA，与细胞增殖、分化、生长、凋亡及应激等多种生命活动关系密切，在维持机体生理平衡中具有重要作用[8]。miRNA虽然只占人类基因库的2%，但可调控体内约30%基因表达，在不同组织和器官中的表达存在大量差异[9]。miRNA在恶性肿瘤的发生、发展中也具有重要作用，miRNA表达异常可引起靶基因表达异常，从而导致恶性肿瘤的发生、发展[10]。多种miRNA在胃癌的发生、发展及诊治和预后中具有重要价值。如SHI等[11]研究发现，miR-373通过下调波形蛋白抑制胃癌转移。WANG等[12]研究发现，miR-21抑制剂通过PTEN/PI3K/mTOR途径调节胃癌细胞的生物学功能。ZHAO等[13]研究发现，miR-194和miR-29在胃癌诊断和预后中具有重要价值。DONG等[14]发现，miR-133a可直接靶向USP39抑制细胞增殖，并可预测胃癌的预后。

miR-144-3p具有多种生理和病理功能，在脂代谢尤其胆固醇逆行转运中具有重要作用[15]。miR-144-3p在多种恶性肿瘤中表达异常，在多种恶性肿瘤的发生、发展及诊断和预后预测中具有重要价值[16]。如miR-144-3p可通过下调ARID1A促进肾透明细胞癌细胞增殖、转移及舒尼替尼耐药[17]；上调人肺癌细胞系H292中miR-144-3p引起细胞凋亡[18]；miR-144-3p通过丝裂原活化蛋白激酶信号通路靶向富含脯氨酸蛋白11的表达，诱导胰腺癌细胞的细胞周期阻滞和凋亡[19]；miR-144-3p在上皮性卵巢癌组织中低表达，与上皮性卵巢癌的直径、病理分期、分化程度及淋巴结转移关系密切。miR-144-3p可能参与上皮性卵巢癌的发生、发展过程，有望成为上皮性卵巢癌治疗和预后的新靶点[20]。miR-144-3p在宫颈癌组织中低表达，与宫颈癌的临床分期、分化程度及淋巴结转移关系密切，miR-144-3p低表达可促进宫颈癌的发生、发展[21]。

miR-144-3p与胃癌的关系也受到大家关注，如LI等[22]研究发现，miR-144-3p通过靶向前白血病转录因子3，抑制上皮-间质转化来抑制胃癌细胞的增殖、迁移及侵袭。吕弢等[23]研究发现，miR-144-3p靶向调控ABCG2信号通路影响胃癌细胞侵袭和迁移。但目前关于miR-144-3p和胃癌的研究主要集中在细胞水平。本文对胃癌组织中miR-144-3p水平研究发现，胃癌组织中miR-144-3p水平降低，miR-144-3p水平与胃癌的临床分期、淋巴结转移及分化程度关系密切。miR-144-3p低表达者的5年累积生存率和无病生存率较低，miR-144-3p低表达是影响胃癌预后的独立危险因素，表明miR-144-3p可能在胃癌的发生、发展中具有重要作用，与胃癌患者的临床病理特点和预后关系密切。

综上所述，胃癌组织中miR-144-3p水平降低，miR-144-3p在胃癌的诊断和预后评价中具有一定的价值。