张慧，邹晓月，舒扬，向敏，阴晴

近年来各大型医院的实验室为保证检验结果的可靠有效，最大程度地得到质量和能力方面的认可，更好的服务于临床，已经着力推行检验过程的规范化和标准化，纷纷将通过ISO15189《医学实验室质量和能力的专用要求》，即实验室质量和能力认可，纳入到实验室的发展规划中。而在质量体系的构建中，对定量实验进行方法学验证是实验技术要求中的重要一环。我室参考有关文献[1-4]，与一些已经通过ISO15189质量认可的医院沟通交流，结合实际，以乙肝两对半的定量检测为例，就仪器系统精密度、正确度、线性范围、生物参考区间及分析的灵敏度等主要性能指标进行验证[5-9]，探讨Anytest2000TRF时间分辨荧光免疫分析仪简便易行的性能验证方法。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂 上海新波生物技术有限公司Anytest2000TRF时间分辨荧光分析仪；上海新波生物技术有限公司提供的配套试剂、质控品和标准品。

1.2 样本来源 选20个符合标准健康个体血清。

1.3 方法

1.3.1 批内精密度 取两个浓度标准品C低值和E高值，连续重复测定20次，计算x、CV及s值。

1.3.2 中间精密度 取两个浓度标准品C低值和E高值，连续测试5d，每天重复测4次。测试完成后记录检测结果，计算批间的x、CV及s值。

1.3.3 正确度 使用运行新波有证二级标准品C低值和E高值，连续测试5次取x，看测定x是否在标准品范围内，进行正确度验证。

1.3.4 线性范围评估 因低浓度和高浓度病人样品较难收集，故运行新波有证二级标准品B作为低浓度样本，F作为高浓度样本。第一管为低浓度（理想状态为接近或位于线性范围下限）管编号为L；第2管为1份高浓度和3份低浓度标本混合而成；浓度为H×25%+L×75%，第3管为2份高浓度和2份低浓度标本混合而成；浓度为H×50%+L×50%；第4管为3份高浓度和1份的低浓度标本混合而成，H×75%+L×25%；第五管为高浓度接近线性范围高限，高浓度管编号为H。重复测定2～3次，计算x。并计算线性回归方程y=ax+b。重复测定高值和低值标本浓度，取平均值作为样品的理论值。将x与理论值进行比较，验证线性范围[10]。

1.3.5 生物参考区间 选择20个能代表实验室的健康个体，排除酗酒、献血者、血压异常、吸毒、哺乳期、肥胖、妊娠、药物、禁食、吸烟、近期住院及手术的人员，体检各项指标均正常的人员。并采用雅培AXFYM仪器上完成测试的五项全阴样本。 测试此20份血清。按照本实验室标准操作程序采集、处理、分析标本进行参考区间验证[11，12]。

1.3.6 灵敏度 (检测低限)取阴性血清作为空白血清，每个项目连续重复测定20次，计算x及s。检测低限=x空白+2s空白。

1.4 统计学分析 统计分析采用 SPSS(Version，l3.0)软件包，精密度计算 x、CV 及 s值，正确度计算x，线性范围评估要进行相关分析和回归分析，灵敏度计算x及s。

2 结果

2.1 批内精密度及中间精密度 各组数据的变异系数均小于判断标准。见表1、表2和表3。

2.2 正确度 运行新波有证二级标准品C低值和E高值，连续测试5次取得均值，实测均值在标准品均值范围内。验证通过。见表4。

2.3 线线性范围 比较实测值 HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb均值与理论值，相关性结果符合厂家的判断标准：a值在1±0.05范围内，相关系数 r≥0.975。 详见下图 1、表 5。

2.4 生物参考区间 判断标准是实验方案如果20个参考个体中不超过2例的观察值在原始的参考限之外，那么厂商提供的参考区间可以接受；如果3例以上超出界限，再选择20个参考个体进行验证，若少于或等于2个观测值超过原始参考限，则可接受，若还有3个超出参考限，需要重新检查各种条件，决定是否建立自己参考区间。我室所选20个参考个体均在在原始的参考限内，厂商提供的参考区间可以接受。结果见表6。

表1 批内精密度低值和高值验证结果

表2 中间精密度低值验证结果

表3 中间精密度高值验证结果

表4 标准品范围及正确度验证结果

表5 线性范围评估结果

图1 五项相关性散点图

3.5 灵敏度 所测检测低限数据小于试剂说明书要求为验证通过，验证结果见表7。

3 讨论

Anytest2000TRF时间分辨荧光分析仪是一台半自动的免疫检测仪器。我室主要用来定量检测乙肝五项[13]。为保证其检验结果的准确可靠，我们每天进行室内质控、参加卫计委和江苏省临床检验中心组织的室间质量控制，均取得好成绩。但这远远不够，ISO15189认可中规定：实验室对新购置的仪器，遇到重大投诉，重要零件及试剂更换后均需要对仪器的主要性能指标进行验证，从而保证检验结果的准确可靠。精密度、正确度、线性范围和生物参考区间、灵敏度等性能参数是Anytest2000TRF主要性能指标，目前各临床实验室多依赖制造商所提供的线性范围、参考区间，分析灵敏度值。基于这样的现状，我室通过对相关质量认可文件的学习，经过周密的实验设计，对这五个方面进行了性能验证[14-16]。结果显示HBsAg、HBsAb中间及批内精密度CV值均＜15%；HBeAg、HBeAb、HBcAb中间及批内精密度CV均＜20%；运行新波有证二级标准品C低值和E高值，连续测试5次取得均值，实测均值在标准品均值范围内，正确度符合标准；比较实测值 HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb均值与理论值，相关性结果符合厂家的判断标准：a值在1±0.05范围内，相关系数r≥0.975；我室所选20个参考个体均在在原始的参考限内，厂商提供的参考区间可以接受；HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb 分 析 的 灵敏度 （检测低限）值分别小于0.2ng/ml、5mIU/ml、0.5PEIU/ml、0.1PEIU/ml、0.5PEIU/ml， 所测检测 低限数据小于试剂说明书要求；验证结果显示Anytest2000TRF测定的乙肝两对半分析性能满足厂商规定的标准。仪器各方面性能良好，测定样本快速准确，精密可靠。可以适应临床的需要。我室建立的分析仪性能验证方案和方法有助于提高仪器的检测质量。但我们的性能验证方案也存在不足之处，就是对实验样品的选择上，据文献及一些质量认可的文件要求，选择病人的标本作为实验样品是最理想的[10]，由于病人标本较难获取，精密度、正确度、线性范围的性能验证我们选用了标准品代替。所以在以后的工作中我们要注意搜集一些高值、低值、不同年龄及性别的乙肝两对半样品来做性能验证，以期能取得更为准确可信的实验结果。

表6 参考区间验证结果

表7 灵敏度验证结果