欧阳骞 ，陈慧娟 ，徐芳菲 ，黄先明 ，邱宇安 ，罗文政

胃癌是消化系统最常见的恶性肿瘤之一，其起病隐匿，大多数患者在就诊时就已处于进展期，因此其预后较差[1-3]，探索新型抗胃癌药物一直是临床肿瘤学研究、药理学研究的热点。他汀类药物是目前临床上治疗高胆固醇血症的主要药物，其通过抑制羟甲基戊二酰单酰辅酶 A（HMG-CoA）还原酶发挥降低血清胆固醇作用[4]。近年来，诸多研究显示他汀类药物还具有抑制肿瘤增殖，诱导肿瘤细胞凋亡与分化，降低肿瘤细胞侵袭转移能力等作用[5，6]。辛伐他汀是临床上常用的他汀类降血脂药物，本研究旨在探讨辛伐他汀诱导胃癌BGC-823细胞凋亡的效应，现报告如下。

1 材料与方法

1.1实验材料 人胃癌BGC-823细胞由上海信然生物科技有限公司提供，DMEM培养基由美国Promega公司提供，CCK-8试剂盒、Annexin V/PI试剂盒均由联科生物科技有限公司提供，FACSCALIBUR流式细胞仪由美国B-D公司提供，HBS-1096A酶标仪由南京德铁公司提供。

1.2 方法

1.2.1 CCK-8细胞增殖法检测胃癌BGC-823细胞生长抑制率 将对数生长期胃癌BGC-823细胞接种于每孔含DMEM培养液（青霉素、链霉素浓度均为 100IU/ml）180μl的 96 孔板中，3×103细胞/孔，向 各 孔 中 加 入 50.00μmol/L、25.00μmol/L、12.50μmol/L、6.25μmol/L 辛伐他汀 20μl，因此这 4个反应体系中辛伐他汀终浓度分别为5.00μmol/L、2.50μmol/L、1.25μmol/L、0.63μmol/L， 注意同时设立空白对照，每个样本作6个复孔。5%CO2条件下培养 68h后每孔中加入 CCK-8溶液 20μl，在540nm波长处采用酶标仪测定吸光度值，并根据试验孔、空白对照孔吸光度值计算胃癌BGC-823细胞生长抑制率，并进一步根据辛伐他汀终浓度及其对应的生长抑制率求得辛伐他汀对胃癌BGC-823细胞的药物半数抑制浓度（IC50）。生长抑制率（%）=（无药细胞对照孔A值平均值-用药孔A值平均值）/无药细胞对照孔A值平均值×100%，并采用GraphPad Prism 5软件计算IC50。

1.2.2 流式细胞法检测胃癌BGC-823细胞凋亡率将对数生长期胃癌BGC-823细胞接种于96孔板中，1×106细胞/孔，采用上述方法配制辛伐他汀终浓 度 分 别 为 2.00μmol/L、1.00μmol/L、0.00μmol/L的3个反应体系，经48h后收集细胞制备1×106细胞/L的单细胞悬液，取500μl单细胞悬液加入Annexin V/PI各 5μl，避光染色 30min后采用FACSC-ALIBUR流式细胞仪FL1、FL3双通道检测细胞凋亡率。

1.3 统计学分析 采用SPSS 19.0统计软件，不同反应体系中胃癌BGC-823细胞生长抑制率、凋亡率比较采用单因素方差分析、两两比较q检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 四组反应体系中胃癌BGC-823细胞生长抑制率的比较 A组、B组、C组、D组胃癌BGC-823细胞生长抑制率比较差异有统计学意义（P＜0.01），A组生长抑制率显著高于B组、C组、D组（P＜0.01），B组生长抑制率显著高于C组、D组 （P＜0.01），C组生长抑制率显著D组（P＜0.01）。辛伐他汀对胃癌BGC-823细胞的IC50为1.15μmol/L。见表1。

表1 4组反应体系中胃癌细胞生长抑制率的比较（x±s，%）

2.2 三组反应体系中胃癌BGC-823细胞凋亡率的比较 E组、F组、G组胃癌BGC-823细胞凋亡率比较差异有统计学意义（P＜0.01），E组凋亡率显著高于F组、G组 （P＜0.01），F组凋亡率显著高于G组（P＜0.01）。 见表 2。

表2 三组反应体系中胃癌BGC-823细胞凋亡率的比较（x±s，%）

3 讨论

胃癌是消化系统最常见的恶性肿瘤之一，其位居我国城市地区恶性肿瘤发病率、死亡率的第三位，男性发病率高于女性[7-9]。胃癌的病因与地域环境、饮食习惯、幽门螺杆菌感染、遗传和基因等方面相关[10]。与其他大多数恶性肿瘤一样，胃癌起病隐匿，很多病人早期并没有明显的临床表现，仅表现出上腹部疼痛、恶心、食欲不振等非典型消化道症状，但随着肿瘤的进展，其病情进入中晚期，呕血、黑便、消化道梗阻、消瘦、恶病质等典型的临床症状及体征逐步出现，但此时病人多已丧失最佳手术治疗机会。基于上述情况，在将来很长一段时间内，胃癌病人仍然需要采用各种药物进行抗肿瘤治疗，包括早中期胃癌的围手术期药物治疗，晚期胃癌的药物姑息治疗等，因此有必要探索安全、有效的抗胃癌药物应用于临床。

他汀类药物是目前临床上使用最广、最有效的降胆固醇药物。近年来，随着对抗肿瘤辅助治疗药物的不断深入研究，他汀类药物被认为可通过抑制肿瘤细胞增殖、转移，促进肿瘤细胞凋亡，抑制肿瘤血管生成等机制发挥一定的抗肿瘤的作用。辛伐他汀是临床上最常用的他汀类药物，目前多项研究发现辛伐他汀可以通过多种分子机制对各种肿瘤细胞产生影响，包括神经胶质瘤细胞、非小细胞肺癌细胞、头颈部鳞癌细胞、乳腺癌细胞、黑色素瘤细胞等[11-13]。既往亦有研究，辛伐他汀可通过上调Bax蛋白，下调Bcl-2、Survivin蛋白表达等机制抑制胃癌SGC-7901细胞生长，并促进胃癌细胞凋亡[14，15]。

为研究辛伐他汀对不同胃癌细胞系的作用，本课题我们选用胃癌BGC-823细胞作为研究对象，初步研究显示，随着反应体系中辛伐他汀浓度的增加，胃癌BGC-823细胞生长抑制率亦随之升高，各浓度组之间比较差异有显著性，其IC50为1.15μmol/L。进一步根据IC50设计新的反应体系，结果显示胃癌BGC-823细胞凋亡率与反应体系中辛伐他汀浓度密切相关，即辛伐他汀浓度越高，胃癌BGC-823细胞凋亡率同样随之升高。由此可见，辛伐他汀可显著抑制胃癌BGC-823细胞生长并诱导其凋亡，但是其具有机制有待临床进一步研究。