葛 威 于在诚 张仁泉 康宁宁 万 军 司盼盼

(安徽医科大学第一附属医院胸外科，安徽 合肥 230000)

食管癌组织中VEGF与MMP- 2的表达及与淋巴结转移的关系

葛 威 于在诚 张仁泉 康宁宁 万 军 司盼盼

(安徽医科大学第一附属医院胸外科，安徽 合肥 230000)

目的 探讨食管癌组织中血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶(MMP)- 2的表达水平及其与淋巴结转移的关系。方法 133例食管癌患者为实验组，30例食管良性病变患者为对照组，采用免疫组织化学法测定两组组织标本中VEGF、MMP- 2表达水平，并分析其与淋巴结转移的关系。结果 VEGF、MMP- 2主要在病变组织细胞的胞质中表达阳性，且实验组阳性表达率高于对照组(P<0.05)。高分化、Ⅲ+Ⅳ期、淋巴结转移的食管癌患者组织标本VEGF、MMP- 2阳性表达率高于中、低分化、Ⅰ+Ⅱ期、无淋巴结转移食管癌患者(P<0.05)。经Spearman秩相关分析，VEGF与MMP- 2呈正相关(r=0.339，P<0.05)。结论 食管癌组织中VEGF、MMP- 2水平呈高表达，且与淋巴结转移密切相关，联合检测有助于早期诊断食管癌、评估患者预后。

食管癌；血管内皮生长因子；基质金属蛋白酶- 2；淋巴结转移

食管癌早期缺乏特异性的临床症状和体征，很多患者被确诊时已处于中晚期，延误了治疗的最佳时机。研究表明，多种因素共同作用参与了恶性肿瘤的发生发展过程，其中肿瘤浸润以及淋巴结转移两个生物学特征对恶性肿瘤的治疗以及预后有重要的影响〔1〕。在肿瘤的生长及转移过程中，肿瘤组织内的血管生成与其联系紧密。血管内皮生长因子(VEGF)是血管通透性因子，主要在乳腺癌、大肠癌等恶性肿瘤组织中呈高度表达，在血管通透能力提高后引起新血管快速繁殖扩散，VEGF的高表达是影响患者预后以及肿瘤侵袭转移的重要因素〔2〕。基质金属蛋白酶(MMP)- 2是一种可使各种细胞外基质以及基底膜降解的未被糖化的明胶酶，主要功能是使Ⅳ型胶原降解。报道显示〔3〕，MMP- 2可在一定程度上促进恶性肿瘤细胞向其他组织侵袭以及转移。关于VEGF、MMP- 2在食管癌组织中的表达情况及其与淋巴结转移关系的研究，目前相关的报道相对较少。本文旨在探讨其与淋巴结转移的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集2013年8月至2016年8月安徽医科大学第一附属医院收治的133例食管癌患者的组织标本为实验组，纳入标准：①术后均经病理组织学检查确诊；②术前未经任何放化疗治疗；③未接受可能影响本研究结果的药物治疗者；④患者及家属签署知情同意书；⑤获得医院伦理委员会的批准。排除标准：①妊娠期及哺乳期的妇女；②心功能不全者；③肝、肾功能障碍者；④合并有其他恶性肿瘤。其中男72例，女61例；年龄43～79〔平均(51.37±12.50)〕岁；分化程度：高分化45例，中、低分化88例；TNM分期〔4〕：Ⅰ+Ⅱ期73例，Ⅲ+Ⅳ期60例；组织学类型：57例鳞癌，41例腺癌，35例小细胞癌；57例有淋巴结转移，76例未出现淋巴结转移。于同期随机选取30例术后经病理组织学检查证实为食管良性病变患者的组织标本为对照组，其中男19例，女11例；年龄38～75〔平均(48.92±14.11)〕岁。两组性别及年龄比较差异无统计学意义(P<0.05)，具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 试剂 兔抗人VEGF抗体(美国Antibody diagnosis公司)、鼠抗人MMP- 2抗体(美国Chemicon公司)。

1.2.2 检测方法 对组织标本采用免疫组织化学染色，即将制作好的组织切片标本经过脱蜡和水化处理，采用组织抗原微波进行修复，加入10%的羊血清封闭，滴加一抗后在4℃的环境下过夜，然后加入生物素标记的二抗，在室温下孵育10 min后滴加过氧化物酶溶液，室温下孵育10 min，各个步骤之间均以磷酸盐缓冲液(PBS)持续冲洗5 min，连续冲洗3次，二氨基联苯胺(DAB)显色后进行脱水、透明以及封片处理。以PBS代替一抗染色的标本作为阴性对照标本，以VEGF、MMP- 2表达结果显示为阳性的食管癌组织为阳性标本。

1.3 评价标准 根据细胞的染色程度进行评分，其中0分为细胞未显色，1分为细胞染色为黄色，2分为细胞染色为棕黄色，3分为细胞染色为明显的棕褐色；根据VEGF、MMP- 2阳性细胞数目占切片细胞的比例进行评分，其中0分为阳性细胞数目的比例≤5%，1分为比例在6%～25%，2分为比例在26%～50%，3分为比例在51%～75%，4分为比例≥76%。将染色程度评分与阳性细胞比例评分相加，阳性为评分之和>3分，阴性为评分之和≤3分〔5〕。

1.4 统计学方法 应用SPSS21.0软件进行t及χ2检验、Spearman秩相关分析。

2 结 果

2.1 VEGF与MMP- 2在病变组织中的表达情况 VEGF、MMP- 2主要在病变组织细胞的胞质中表达阳性，并且实验组阳性表达率〔105例(78.95%)，79例(59.40%)〕高于对照组〔7例(23.33%)，5例(16.67%)；χ2=35.216,17.896；均P<0.001〕。

2.2 VEGF、MMP- 2阳性表达率与临床病理特征的关系 高分化、Ⅲ+Ⅳ期、有淋巴结转移的食管癌患者组织标本中VEGF、MMP- 2阳性表达率高于中、低分化、Ⅰ+Ⅱ期、无淋巴结转移的食管癌患者(P<0.05)，不同性别、年龄、组织学类型食管癌患者组织标本中VEGF、MMP- 2阳性表达率比较差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

2.3 VEGF、MMP- 2的相关性分析 VEGF与MMP- 2呈正相关(r=0.339，P<0.05)。

表1 VEGF、MMP- 2阳性表达率与临床病理特征的关系〔n(%)〕

3 讨 论

在血源性扩散时，肿瘤细胞通过淋巴细胞进行扩散进而形成淋巴结的转移，临床上确诊的食管癌多数伴有淋巴结的转移，颈部淋巴结状态是决定预后和治疗方法的关键之一〔6〕。恶性肿瘤细胞的扩散转移过程中，蛋白类物质以及多种细胞因子参与到其中。VEGF作为血小板源性生长因子家族成员，具有高度的特异性，可调节内皮细胞的分裂和增殖，作为重要的血管内皮生长刺激因子参与了肿瘤血管的形成过程，同时，VEGF还可增加血管的通透性，促进血管的生成以及新基质的形成〔7〕。研究表明〔8〕，VEGF的表达可以评估血管上皮细胞的增殖、生长以及转移，同时还能有效评估病变部位肿瘤细胞的生长速度以及转移方向等。在恶性肿瘤细胞中，VEGF呈高度表达，并且其与肿瘤的侵袭性转移和预后密切相关〔9〕。MMP具有使细胞外基质降解的功能，同时也能促进肿瘤细胞的侵袭、转移以及血管的生成。MMP- 2属于Ⅳ型胶原酶，在肿瘤细胞基底膜、外基质存在的Ⅳ型胶原降解过程中，MMP- 2作为关键酶在其中发挥重要作用，并进一步损伤细胞外基质而促进恶性肿瘤细胞快速的浸润至其他组织并且扩散〔10〕。研究认为〔11〕，因MMP- 2在Ⅳ型胶原降解过程中发挥的特异性作用，将其作为肿瘤侵袭程度以及转移的评价指标有重要价值。有报道发现〔12〕，在泌尿系统恶性肿瘤、乳腺癌等恶性肿瘤中，MMP- 2均呈高水平表达，同时参与了病变部位肿瘤细胞的转移、浸润等。本研究结果提示VEGF、MMP- 2可能参与了食管癌的发生过程，早期检测有助于早期辅助诊断食管癌。进一步的结果提示VEGF、MMP- 2参与了食管的发生发展过程，联合检测VEGF和MMP- 2可评估食管癌患者的病情进展和淋巴结的转移情况，进而判断预后。研究显示〔13〕，VEGF的表达上调可促进MMP- 2的表达，两者协同作用促进新生血管的形成以及细胞外基质的降解。本研究相关性分析显示，VEGF与MMP- 2通过协同作用，使新生血管生成以及细胞外基质降解，进而促进恶性肿瘤细胞的侵袭以及发生淋巴结转移。

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11 Aroner SA,Rosner BA,Tamimi RM,etal.Plasma matrix metalloproteinase 2 levels and breast cancer risk〔J〕.Cancer Epidemiol,2015;39(3):321- 7.

12 Radenkovic S,Konjevic G,Jurisic V,etal.Values of MMP- 2 and MMP- 9 in tumor tissue of basal- like breast cancer patients〔J〕.Cell Biochem Biophys,2014;68(1):143- 52.

13 Suh YG,Lee EJ,Cha H,etal.Prognostic values of vascular endothelial growth factor and matrix metalloproteinase- 2 in hepatocellular carcinoma after radiotherapy〔J〕.Dig Dis,2014;32(6):725- 32.

〔2017- 05- 15修回〕

(编辑 袁左鸣/滕欣航)

于在诚(1957- )，男，主任医师，主要从事食管癌的外科治疗研究。

葛 威(1983- )，男，主治医师，主要从事食管癌的外科治疗研究。

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A

1005- 9202(2017)15- 3792- 02；

10.3969/j.issn.1005- 9202.2017.15.066