宋建，崔北勇，王绪韶，杨忠诚，胡华靖



病毒性心肌炎患儿治疗前后外周血T细胞亚群变化分析

宋建，崔北勇，王绪韶，杨忠诚，胡华靖

[摘要]目的：观察病毒性心肌炎患儿外周血T细胞亚群变化，探讨其发病机制及其与预后关系。方法：采用流式细胞技术检测2014年2月-2015年2月在蚌埠市第一人民医院初诊及治疗的40例病毒性心肌炎患儿(患儿组)外周血T细胞亚群水平；对照组为40例同期健康体检儿童。结果：患儿组患儿入院时外周血CD3，CD4，CD4/CD8比值低于对照组，CD8高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)；患儿组患儿入院时与治疗有效后T细胞亚群较对照组，CD3，CD4升高，CD8下降，CD4/CD8比值基本正常，差异有统计学意义(P<0.05)。结论：病毒性心肌炎患儿机体存在细胞免疫失调，外周血T细胞亚群水平变化对病毒性心肌炎的发生、发展及预后判断有重要作用。

[关键词]病毒性心肌炎； T细胞亚群； 免疫损害； 预后； 儿童

病毒性心肌炎在儿科后天性心血管疾病中最为常见，常见病毒为柯萨奇B组2-5型，A组9型，其次埃克病毒、脊髓灰质炎病毒、腺病毒、肝炎病毒、流感和副流感病毒等[1]。在病毒流行季节，约5%的患儿发生心肌炎，其中约12.5%的急性病毒性心肌炎慢性期后可发展成扩张性心肌病[2]。本病大多预后良好，少数可在急性期内可发生心力衰竭，甚至猝死。临床尚无特殊治疗，以抗病毒及营养心肌治疗为主，目前发现一些中药制剂，如黄芪、参麦、复方丹参等，在临床治疗中取得一定效果。本病发机制尚不十分清楚，目前认为可能为病毒对心肌直接损害和自身免疫引起的心肌损害共同作用，病毒所致的心脏病理改变无特异性，但有研究表明病毒感染后诱发的特异性及非特异性免疫应答导致的心肌组织病理损害更为重要[3]。T淋巴细胞在人体免疫系统中发挥重要作用，CD3，CD4，CD8及CD4/CD8比值的升高或降低，可反映机体免疫功能亢进或低下，本文研究病毒性心肌炎患儿治疗前后T细胞亚群变化，以分析其与疾病之间关系，探讨其发病机理。

1资料与方法

1．1资料选取2014年2月-2015年2月在我院初诊及住院治疗的病毒性心肌炎患儿40例(患儿组)，纳入标准：符合中华医学会儿科学分会心血管组在1999年修订的病毒性心肌炎诊断标准[4]，并排除合并其他免疫性疾病。其中男22例，女18例，年龄6月-13.6岁，平均年龄4.5岁，平均疗程15.2 d；选取同期门诊体检的健康儿童40例做对照组，2组儿童的年龄、性别无统计学差异(P>0.05)。相关研究取得家长的书面知情同意。

1．2方法外周血T细胞亚群测定采用荧光标记的抗体进行染色，并在流式细胞仪(FACS Calibur美国B.D公司)上进行分析，试剂购置于美国B.D公司。所有患儿于入院24 h内采集静脉血测定T细胞亚群水平，患儿组约在治疗2周后复查；对照组于门诊抽血，30 min内送检。

2结果

2．12组儿童外周血T细胞亚群水平比较见表1。

表1　2组儿童外周血T细胞亚群比较 ±s)

2．2患儿组儿童入院时与治疗2周后外周血T细胞亚群比较见表2。其中有34例患儿在治疗10～14 d内病情明显好转，表现为临床症状、心肌损害标志物(CKMB和心肌肌钙蛋白)、心电图、X线心胸比值基本恢复正常或明显改善；另外6例患儿病情改善不明显或进一步加重，故未纳入治疗前后T细胞亚群水平比较的统计中。这6例患儿中复查T细胞亚群中CD4/CD8比值，其中4例持续降低，2例升高且明显高出正常范围。

表2　患儿组入院时与治疗2周后外周血T细胞亚群±s)

3讨论

目前，病毒性心肌炎的发病机制并不十分明确，且临床缺乏特异性治疗，心肌活检这一金指标由于操作困难，有伦理学争议故未纳入新的国内诊断标准，目前临床急需对病毒性心肌炎诊断及预后判断的新指标[5]。病毒感染及自身免疫性疾病与T淋巴细胞水平及平衡有密切联系，T淋巴细胞主管细胞免疫，辅助体液免疫，在抗感染及调节人体免疫自稳过程中起决定作用。在T细胞亚群(CD3/CD4/CD8)检测中，CD3细胞为成熟T淋巴细胞，反映人体T细胞总体水平；CD4细胞为诱导/辅助性T淋巴细胞，辅助体内细胞免疫及体液免疫的进行，是免疫过程中最重要的枢纽细胞，如CD4细胞功能下降，可引起B细胞不能充分分化，抗体生成下降；CD8细胞为抑制/杀伤细胞，免疫反应中直接杀伤性细胞，如CD8细胞功能下降，不能有效清除病毒感染的细胞，可引起病情加剧；CD4/CD8比值为判断人体免疫功能平衡的敏感指标，比值下降提示免疫功能低下，比值过高提示自身免疫性疾病可能。

本文观察结果显示，病毒性心肌炎患儿入院时外周血CD3细胞，CD4细胞，CD4/CD8比值水平较对照组均有所下降，差异有统计学意义(P<0.05)，而CD8细胞较健康组上升，差异有显著统计学意义(P<0.05)，这与张称心等[6]报道一致。CD4细胞下降时可导致T细胞，B细胞，NK细胞，巨噬细胞功能下降；CD8细胞上升表明体内细胞免疫反应激烈，CD8细胞(细胞毒性T细胞)被大量激活，激活的细胞毒性T细胞通过穿孔素和颗粒酶介导的细胞毒作用、Fas/FasL介导的细胞毒作用及其联合嗜心肌抗体、相关细胞因子等对感染及非感染心肌细胞产生直接杀伤作用，导致心肌炎症。Woodruff等[7]首先进行了研究并发现用切除小鼠胸腺的方法，去除血中T细胞，可减轻柯萨奇病毒B3感染引起心肌炎症反应。Kishimoto等[8]用T细胞接种的方法，调节辅助性T细胞与杀伤性T细胞而控制细胞介导的免疫损害，改善感染柯萨奇病毒B3小鼠的心肌损伤。说明感染后激活的T细胞反应加重心肌损伤的发生。

经过2周左右的治疗，34例治疗好转的患儿与入院时外周血CD3细胞，CD4细胞，CD4/CD8比值水平相比明显升高，CD8细胞水平下降，差异有统计学意义(P<0.05)，这与罗永姣等[9]研究结果相一致。说明机体的免疫功能在急性期是紊乱的，经过积极有效的治疗后，CD3细胞、CD4细胞水平上升至接近正常，说明患儿免疫功能恢复；CD8细胞下降至正常范围，病毒所诱发的自身免疫损伤停止。另外6例患儿，其中4例CD8细胞仍升高明显，表明细胞免疫过强造成的自身免疫损害持续存在，2例CD4细胞、CD8细胞低于健康组，可能为病毒感染持续扩散，消耗大量免疫细胞所致。因此，可进一步收集病例对临床治疗效果进行分类，分析与T细胞亚群的定量关系，为临床的治疗分析及预后判断提供新的可靠的参考。

综上所述，通过对病毒性心肌炎患儿外周血T细胞亚群水平研究发现，CD3，CD4，CD8及CD4/CD8水平变化，可作为病毒性心肌炎病情评估及预后判断的重要指标，同时揭示病毒性心肌炎的部分发病机制与T细胞免疫紊乱有关，并为通过改善免疫功能治疗病毒性心肌炎提供相关临床依据。

[参考文献]

[1]Suddaby EC.Viral myocarditis in children[J].Crit Care Nurse,1996,16(4):73-82．

[2]曹林生,廖玉华．心脏病学[M].北京:人民卫生出版社,2010:834-840．

[3]Al-Biltagi M,Issa M,Hagar HA,et al．Circulating cardiac troponins levels and cardiac dysfunction in children with acute and fulminant viral myocarditis[J].Acta Paediatr,2010,99(10):1510-1516．

[4]吴铁吉．病毒性心肌炎诊断标准(修订草案)[J].中华儿科杂志,2000,38(2):75．

[5]陈怀生,温隽珉,吴胜楠．病毒性心肌炎临床诊治及相关问题[J].中国实用内科杂志，2008,28(6):510-512．

[6]张称心,吴金霞．小儿病毒性心肌炎中T细胞亚群变化的分析[J].内蒙古医学杂志,2013,45(9):1042-1044．

[7]Woodruff JE,Woodruff JJ．Involvement of T lymphocytes in the pathogenesis of coxsackie virus B3 heart disease[J].Immunol,1974,113(6):1726-1734．

[8]Kishimoto C,Takada H,Hiraoka Y,et al．Protection against murine coxsackie virus B3 myocardit is by T cell vaccination[J].J Mol Cell Cardiol,2000,32(12):2269-2277．

[9]罗永姣,刘红英．病毒性心肌炎患儿的T细胞免疫变化[J].华南大学学报,2010，38(1):96-97．

Analysis of changes of T lymphocyte subsets in child viral myocarditis before and after treatment

SONGJian,CUIBei-yong,WANGXu-shao,etal.

(BengbuFirstPeople'sHospital,Anhui233000,China)

【Abstract】Objective：To study the changes of T lymphocyte subsets and to explore the possible pathogenesis and its relationship with prognosis.Methods:T lymphocyte subsets in the peripheral blood were determined with flow cytometry.40 patients with viral myocarditis (VMC) and 40 healthy children were selected in this study.The difference in age and sex between the two groups was not significant.Results:In the VMC group on admission,CD3,CD4 and the ratio of CD4/CD8 of T lymphocyte subsets were significantly lower than those of the control group.CD8 of T lymphocyte subsets was significantly higher.After the treatment,CD3 and CD4 of the VMC group increased,while CD8 decreased.The ratio of CD4/CD8 turned back to normal condition.Conclusion:Disturbance of immune regulatory function may occur in children with viral myocarditis.T lymphocyte subsets plays an important role in the morbidity,development and prognosis of viral myocarditis.

【Key words】Viral myocarditis; T lymphocyte subsets; Immune damage; Prognosis; Children

(收稿日期：2016-01-05)

[中图分类号]R 542.21

[文献标识码]A

[文章编号]1008-7044(2016)03-0274-03

DOI：10.14126/j.cnki.1008-7044.2016.03.009

[作者简介]宋建(1986-)，男，医师，研究生。

[作者单位] 安徽省蚌埠市第一人民医院 儿科，233000

·论著·