王 涛，刘跃华，郑和义，左亚刚，方 凯

(中国医学科学院 北京协和医学院 北京协和医院 皮肤科， 北京 100730)

紫外线光疗抑制早期蕈样肉芽肿皮损组织中BCL-2、STAT3、CCL17和CCL27的表达

王 涛，刘跃华*，郑和义，左亚刚，方 凯

(中国医学科学院 北京协和医学院 北京协和医院 皮肤科， 北京 100730)

BCL-2是研究最早的与细胞凋亡相关的一类原癌基因。目前有关治疗前后BCL-2蛋白表达变化的研究仍较少，探讨治疗前后BCL-2蛋白表达的变化是目前需要进一步研究的问题。STAT3是信号传导和转录活化因子家族中与肿瘤关系最密切的基因之一，STAT3持续活化与肿瘤的发生发展和预后相关。CCL17和CCL27在淋巴细胞归巢机制中起重要作用，与受体结合可使得T淋巴细胞向皮肤迁移，在蕈样肉芽肿(Mycosis Fungoides,MF)发病机制起重要作用。本研究检测BCL-2，STAT3，CCL17和CCL27早期MF经紫外线光疗治疗前后表达的变化。

1 材料与方法

1.1 材料：1)主要实验试剂 BCL-2(工作液BCL-2-100，中杉金桥公司)；STAT3和CCL27(浓度分别为1∶50和1∶100,SANTA CRUZ公司)；CCL17(1∶1200，博奥森公司)。2)对象：24例早期蕈样肉芽肿患者经PUVA或NB-UVB及PUVA治疗缓解后联合NB-UVB等3种治疗前后48份皮损处石蜡包埋组织标本。整形外科整形者眼皮组织为阴性对照，以预实验中阳性标本为阳性对照。

1.2 实验方法：采用免疫组化染色法，按照试剂盒说明书操作，检测BCL-2、STAT3、CCL17和CCL27的表达。根据文献，结果采用双盲判定和评分。

1.3 统计学分析：采用SPSS 17.0 软件进行数据分析，采用Pearson卡方检验，治疗后阳性率与复发率之间比较采用Sprearmen相关性检验。

2 结果

2.1 BCL-2蛋白在治疗前后皮损组织中的表达:治疗前BCL-2在真皮浸润的肿瘤性淋巴细胞中阳性表达共22例，10例(+)，9例(++)，3例(+++)，无表达2例；治疗后BCL-2表达显著降低，阳性仅12例，其中9例(+)，3例(++)，无表达12例(Plt;0.05)(图1)。

2.2 CCL-17蛋白在治疗前后皮损组织中的表达：治疗前CCL-17在角质形成细胞中阳性表达共16例，15例(+)，1例(++)，无表达8例；治疗后CCL-17表达显著降低，阳性6例均为(+)，无表达18例(Plt;0.05)。

2.3 CCL-27蛋白在治疗前后皮损组织中的表达：治疗前CCL-27在角质形成细胞阳性表达共18例，16例(+)，1例(++)，1例(+++)，无表达6例；治疗后CCL-27表达显著降低，阳性7例均为(+)，无表达17例(Plt;0.05)。

2.4 STAT3蛋白在治疗前后表皮和淋巴细胞中的表达：治疗前STAT3在角质形成细胞中阳性表达共19例，15例(+)，3例(++)，1例(+++)，无表达5例；治疗后STAT3表达显著降低，阳性11例均为(+)，无表达13例(Plt;0.05)；治疗前STAT3在活化的肿瘤性淋巴细胞表达共7例，6例(+)，1例(++)，无表达17例；治疗后无显著性降低，阳性3例均为(+)，无表达21例。(图2)

图1 BCL-2在肿瘤性淋巴细胞中阳性表达Fig 1 Expression of BCL-2 protein in the tumor lymphocytes (×200)

图2 STAT3蛋白在治疗前后表皮和淋巴细胞中的表达Fig 2 Expressions of STAT3 proteins in the keratinocytes and tumor lymphocytes

3 讨论

本研究发现，紫外线光疗后BCL-2的表达下降，说明光疗可能通过抑制BCL-2的表达而减少亲表皮的T细胞出现凋亡障碍的发生。有作者发现，UVA和UVB通过不同的机制引起细胞凋亡，P53和BCL-2表达平衡在紫外线诱导的细胞凋亡中起重要作用[1]。本研究中，UVB和PUVA组之间BCL-2表达阳性率有所下降，但UVB组中有两例患者在治疗后BCL-2表达反而增加，可能的原因是UVB并不直接降低BCL-2的表达，可能存在其他方面的作用。

本研究发现，紫外线光疗后CCL17和CCL27表达下降。有研究认为，UVA抑制角质形成细胞中CCL17 mRNA表达和蛋白分泌存在剂量依赖关系可能是紫外线光疗的作用机制[2]。有研究发现治疗后CCL27正常或者正常上限以内有较低的复发率和较长时间的平均无病生存期，CCL27 含量在治疗后较高者，更易复发[3]。

本研究结果显示，在早期MF皮损中，表皮角质形成细胞可出现STAT3阳性表达，而仅部分的肿瘤性淋巴细胞出现阳性表达，但二者均随病情分期加重而阳性率增高。皮肤经UVB照射后引起STAT3活化，可降低UVB引起的细胞凋亡反应，并出现随时间增加而递增的白细胞浸润和增生[4]。

因此，紫外线光疗可能通过以下机制治疗早期MF：下调BCL-2、STAT3等抗凋亡蛋白的表达来降低早期MF皮损中肿瘤细胞的活性，来促进肿瘤细胞的凋亡；下调表皮角质形成细胞内活化的STAT3蛋白含量，减少了表皮内浸润的T细胞的数量；下调趋化因子CCL17和CCL27的表达，从而抑制了T细胞向表皮内浸润，较少了恶变的可能性。

[1] Zhou C, Yang Q, Trempe JP. Enhancement of UV-induced cytotoxicity by the adeno-associated virus replication proteins[J]. Biochim Biophys Acta, 1999,1444:371-383.

[2] Zheng X, Nakamura K, Tojo M,etal. Ultraviolet A irradiation inhibits thymus and activation-regulated chemokine (TARC/CCL17) production by a human keratinocyte HaCaT cell line[J]. Eur J Dermatol, 2003,13:348-353.

[3] Goteri G, Rupoli S, Campanati A,etal. Lesional skin chemokine CTACK/CCL27 expression in mycosis fungoides and disease control by IFN-alpha and PUVA therapy[J]. Am J Transl Res, 2009,1:203-210.

[4] Ahsan H, Aziz MH, Ahmad N. Ultraviolet B exposure activates Stat3 signaling via phosphorylation at tyrosine705 in skin of SKH1 hairless mouse: a target for the management of skin cancer?[J]. Biochem Biophys Res Commun, 2005,333:241-246.

2013-10-26

2013-12-13

*通信作者(correspondingauthor)： yuehualiu@263.net

1001-6325(2014)02-0249-02

R 758.69

A