李大鹏，时利民，张永军，吕春雷，王凤娇

为探讨创伤性失血性休克(THS)对细胞生物膜脂质过氧化水平的影响，笔者建立收缩压下降曲线形成THS动物模型，选择反映脂质过氧化及自由基代谢的重要指标超氧化物歧化酶(SOD)及丙二醛(MDA)为检测指标，探讨THS发生过程中失血量变化及对血浆SOD、MDA的影响，现报告如下。

1 材料和方法

1．1 实验动物选择 选择健康雌性Wistar大鼠10只，SPF 级，体重480 ～530 g，平均(502.9±15.1)g，购于山东省鲁抗医药股份有限公司［实验动物生产许可证:SCXK(鲁)2008－0002］。实验动物在十万级亚屏障环境中恒温、恒湿条件下适应性饲养1周。实验前禁食12 h，自由饮水。

1．2 动物模型制备

1．2．1 动物麻醉与插管 10%水合氯醛进行麻醉，按0.3 ml/100 g大鼠体质量的剂量，腹腔注射方式。麻醉稳定后，将大鼠仰卧固定在解剖台上，右侧腹股沟区备皮，消毒后仔细解剖出其股动脉，分离完毕后对血管进行PE套管插管，并与八导生理记录仪(美国Biopac公司)相连，连接完毕打开三通监测大鼠收缩压、舒张压、平均血压、心率等变化。选择以上消毒方式，解剖出大鼠颈动脉，经颈动脉插入PE套管并与消毒的定量收集管相连，放血及留取血标本。

实验前插管注射肝素生理盐水(2.5 U/ml)进行肝素化抗凝。

1．2．2 模型制备 实验操作前稳定大鼠30 min，检测及记录相关生理功能指标基础值(T1)。选择颈动脉放血管路放血，大鼠收缩压随其放血量增加而快速下降，形成收缩压下降曲线。记录每只大鼠收缩压降至基础值3/4(T2)、基础值2/3(T3)、基础值1/2(T4)、基础值 2/5(T5)、30 mmHg(1 mmHg=0.133 kPa;T6)、基础值 1/5(T7)、10 mmHg(T8)共7个位置的收缩压与相应位置放血量。7个位置定量收集管留取血样(－80℃保存待检)检测T－SOD及MDA。

1．3 T－SOD及MDA检测 主要检测仪器设备包括:722型光栅分光光度计(上海第三分析仪器厂、波长550～532 nm、1 cm光径比色杯)、5415R台式冷冻小型离心机、5810R台式冷冻高速离心机(德国Eppendorf公司)等。

T－SOD及MDA测定试剂盒购自南京建成生物工程研究所。T－SOD检验为羟胺法，MDA检验为TBA法，操作方法及要求按说明书。

2 结果

10只大鼠在T2～T8共7个位置取得失血量、TSOD活力、MDA含量数据，分别按T2～T8进行分组，T2～T8各组失血量、T－SOD活力、MDA含量分别进行比较。

根据统计学散点图，失血量、T－SOD活力、MDA含量之间不存在相关性。

失血量组间比较:T2T3、T5T6、T7T8之间存在显著性差异(P ＜0.05)，T3T4、T4T5、T6T7之间无显著性差异(P＞0.05)。T－SOD活力组间比较:T4T5、T6T7之间存在显著性差异(P ＜0.05)，T2T3、T3T4、T5T6、T7T8之间无显著性差异(P＞0.05)。MDA含量组间比较:T3T4、T5T6、T7T8之间存在显著性差异(P＜0.05)，T2T3、T4T5、T6T7之间无显著性差异(P ＞0.05)，见表 1。

3 讨论

笔者选择大鼠颈动脉插入PE套管的创伤手段致动脉损伤，用大量放血方式致大量、快速失血引起休克，建立THS模型。由于失血性低血容量休克主要病理生理改变是有效循环血容量急剧减少，导致组织低灌注、再灌注损伤等［1］，加之血管收缩反应、总血容量、凝血机制、血液携氧能力、组织氧供等因素影响，失血量在THS发生过程中变化各不相同，而维持脑、肾、肝等重要脏器临界灌注血压值是其中重要因素。

本文收缩压下降曲线中，数据表明失血量在T2～T8各位置变化不相同，组间比较T2～T3有显著性差异，相关位置失血量显著减少，表明 T1～T2位置为THS发生基础;T3～T5无显著性差异，相关位置失血量无显著变化，提示进入代偿阶段;T5～T6有显著性差异，相关位置失血量显著增加。

表1 大鼠失血量、T－SOD活力及MDA含量±s)

表1 大鼠失血量、T－SOD活力及MDA含量±s)

T2 T3 T4 T5 T6 T7 T8失血量(ml) 0．67±0.38 0.31±0.170.56±0.54 0.45±0.220.91±0.44 0.65±0.43 1.18±0.67 T－SOD活力(U/ml)295.7±47.8 304.6±60.2 326.8±60.7 383.8±83.5 371.0±46.5 294.9±56.2 304.4±53.5 MDA(nmol/ml) 2.91±1.00 3.21±2.03 4.33±2.70 3.46±1.31 2.48±1.78 2.38±0.97 3.27±1.70

THS发展可使组织低灌流时间持久，导致组织结构损伤及功能障碍，其中关键是引起细胞生物膜上脂质过氧化及破坏膜结构与功能的机体自由基［2］。SOD是一种氧自由基清除剂，其活力可反映机体清除氧自由基的能力;MDA是脂质过氧化反应的最终产物，可反映氧自由基水平及间接反映细胞受自由基攻击后脂质过氧化的严重程度，MDA升高是机体氧自由基损伤标志［3］。SOD和MDA变化可间接反映氧自由基在体内生成和清除情况，以及对组织损伤程度和体内抗氧化防御作用的功能情况［4－6］。

本文数据表明:THS过程中随大鼠收缩压快速下降，T2～T3时T－SOD活力及MDA组间无显著性差异，T3～T4时随失血量增加MDA水平出现显著升高并维持高水平，之后T4～T5时T－SOD活力也出现显著升高并维持高水平，提高体内清除氧自由基能力;T5～T6时失血量显著增加，MDA组间存在显著性差异，提示高水平MDA含量随失血量增加出现显著下降，之后T6～T7时T－SOD活力随失血量增加也出现显著下降，提示体内清除氧自由基能力显著下降，表明体内大量蓄积自由基、抗氧化保护能力减弱，过量自由基促进脂质过氧化并导致机体生物膜损伤。

本实验可为THS发生及救治过程中控制脂质过氧化、清除自由基、抑制组织细胞氧化损伤等研究提供有益的数据支持。

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［2］杨 伟，王宇鹤，杨永彦，等．高原移居者返平原后血液学及血中MDA和SOD的变化观察［J］．临床医学，2012，7(18):1799－1800．

［3］刘灵芝．丹红注射液对自然衰老大鼠心脏、大脑组织SOD、MDA及GSH －Px的影响［J］．中国实用神经疾病杂志，2012，15(17):73－74．

［4］张歆薇，刘海强，徐胜龙，等．次生作用对大鼠血浆SOD、MDA、NO水平的影响［J］．现代生物医学进展，2012，12(18):3416 －3419．

［5］杨明聪，范小平，王 春．低频超声对大鼠颊囊黏膜溃疡组织SOD、MDA含量的影响［J］．重庆医学，2012，41(26):2711－2713．

［6］吴秀珍，陈方方．急性脑梗死患者治疗前后血清Hcy、hs－CRP、SOD和MDA检测的临床意义［J］．放射免疫学杂志，2012，25(4):388－390．