陈文珠 袁小红

（广东省中医院，广东 广州 510120）

HPLC法测定跌打巴布剂中三七皂苷R1和人参皂苷Rg1含量

陈文珠 袁小红

（广东省中医院，广东 广州 510120）

目的 建立跌打巴布剂中三七皂苷 R1 和人参皂苷 Rg1 的含量测定方法。方法 采用 HPLC 法，以 Agilent TC-C18ODS 柱为色谱柱，以乙腈 -水 (24:76)为流动相，检测波长 203nm，流速 1mL/min。结果 三七皂苷 R1 线性范围为 0.583～29.15μg（r=0.9999，n=5），回收率为 99.9%～100.3%。人参皂苷 Rg1 线性范围为 0.336～16.8μg（r=0.9999，n=5），回收率为 99.8%～100.2%。结论 本方法准确、可靠、灵敏度高，可用于跌打巴布剂的定量检测。

跌打巴布剂；高效液相色谱法；三七皂苷 R1；人参皂苷 Rg1

跌打巴布剂是由乳香、没药、三七、冰片等中药经提取制备而成的巴布剂。原方为《中医伤科学讲义》中的跌打膏，具有活血祛瘀，消肿止痛的功效，临床上用于跌打损伤，骨折伤筋，肿胀疼痛等的治疗。方中的三七为名贵中药，含有多种化学成分，其中三七总皂苷（PNS）为主要有效活性成分，其含量8%～12%[1]。皂苷类成分主要包括三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1等[2]。为了控制跌打巴布剂的质量，建立良好的质量控制方法，本实验以跌打巴布剂中用量较大的三七为质量控制的研究对象，参考文献报道的HPLC方法[3，4]，建立跌打巴布剂中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1含量测定方法，以有效控制跌打巴布剂的质量。

1 仪器与试药

高效液相色谱仪（美国WATERS，515泵，2487紫外检测器，浙江大学N3000色谱工作站）；GR-202AND分析天平（日本）。

人参皂苷Rg1对照品（编号110703-201027，中国药品生物制品检验所）；三七皂苷R1对照品（编号110745-200617，中国药品生物制品检验所）；跌打巴布剂（自制，批号：120316， 120519，120721），阴性制剂按处方制备缺三七巴布剂。乙腈为色谱纯，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适应性试验

色谱条件Agilent TC-C18ODS柱（5μm，250mm×4.6 mm）；Phenomenex保护柱；流动相:乙腈-水（24:76）；流速1mL/min，检测波长为203nm。在上述的色谱条件下，由对照品、供试品和阴性对照溶液分析可知，人参皂苷Rg1、三七皂苷R1的出峰时间分别为15.6、11.1min。理论塔板数按人参皂苷Rg1计算不低于8000，按三七皂苷R1计算不低于9000，且巴布剂辅料和方中其他成分无干扰，见图1。

2.2 溶液的制备

对照品溶液：精密称取干燥的人参皂苷Rg1、三七皂苷R1对照品各1.0mg，置100mL容量瓶中，加甲醇溶解稀释至刻度，摇匀；精密量取溶液5mL，置50mL容量瓶中，加流动相稀释至刻度，即得。

供试品溶液：取跌打巴布剂1片，揭去防粘层，剪成细条，置圆底烧瓶中，精密加入甲醇50mL，置80℃水浴加热2h，滤过，滤液挥去甲醇，加水20mL混悬，用水饱和正丁醇萃取4次，每次20mL，正丁醇液用旋转蒸发仪蒸干，残渣用甲醇溶解并定容至10mL，作为供试品溶液。

阴性对照溶液：取不加三七药材的巴布剂1片，按照供试品溶液制备方法制得阴性对照溶液。

2.3 线性关系

精密称取人参皂苷Rg13.36mg、三七皂苷R15.83mg，用生理盐水分别定容至100mL的容量瓶中，振摇即得浓度为33.6μg/mL的人参皂苷Rg1和58.3μg/mL的三七皂苷R1标准品贮备液。分别对标准品贮备液进行倍比稀释，得到人参皂苷Rg1质量浓度为0.336，0.672，1.344，6.72，16.8μg/mL标准品液；三七皂苷R1质量浓度为0.583，1.166，2.332，11.66，29.15μg/mL标准品液。均进样10μL以标准品浓度（X）对峰面积（Y）进行线性回归，分别得回归方程Y= 4088.2X-740.97，r=0.9999；以及Y=1100.9X-462.9，r=0.999。人参皂苷Rg1在0.336～16.8μg/mL，三七皂苷R1在0.583～29.15μg/mL范围内呈良好的线性关系，在该色谱条件下的最低检测限分别为0.168、0.194μg/mL。

图1 三七皂苷R1、人参皂苷Rg1的HPLC图A.混合对照品；B.样品；C.阴性对照（缺三七）；1. 三七皂苷R1；2. 人参皂苷Rg1

2.4 精密度试验

将上述对照品溶液于冷藏（0～4℃）、避光条件下储存，吸取10μL，连续进样5次，测得人参皂苷Rg1、三七皂苷R1峰面积RSD分别为0.91%、1.22%，说明仪器精密度良好。

2.5 稳定性实验

以16.8，11.66μg/mL的人参皂苷Rg1、三七皂苷R1溶液分别在0，8，12，24h进样10μL，测定峰面积，其RSD 分别为1.22%、1.72%，显示人参皂苷Rg1、三七皂苷R1在24 h内稳定性良好。

2.6 加样回收率试验

取缺三七药材的阴性制剂，分别精密加入人参皂苷Rg1、三七皂苷R1对照品各2.0、3.0、4.0mg，按照“2.2”中供试品制备项下操作。将上述溶液用0.2μm微孔滤膜滤过，取续滤液1.0mL用甲醇稀释至10.0mL，取10μL进样分析。测得人参皂苷Rg1平均回收率为100.2%、99.8%、100.1%，RSD为0.27%、0.45%、0.39%（n=5）；三七皂苷R1平均回收率为99.9%、101.1%、100.3%，RSD为0.44%、0.54%、0.35%（n=5）。

2.7 样品测定

按“2.2”项下方法，制备供试品溶液，进样测定，结果见表1。

3 讨 论

3.1 流动相的选择

本实验中分别考察了不同的流动相甲醇-水、乙腈-水-冰醋酸和乙腈-水，并以不同比例进行测定，以减少出峰时间，获得良好的峰型以及溶剂无干扰为主要目的。结果表明，以乙腈-水（24∶76）作为流动相时，供试品中其它成分对三七皂苷R1测定无干扰，并且三七皂苷R1色谱峰峰形好，分离度高，出峰时间也较早。

表1 样品含量测定结果（n=3）

3.2 供试品提取方法的选择

三七原药材的提取方法，2010版药典采用甲醇回流提取，本实验对比研究了乙醇和甲醇的提取效果，结果甲醇提取更好，故采用甲醇回流提取，水饱和正丁醇萃取，减少其他杂质的干扰。

[1]张继,赵朝伟,赵睿.三七的药理作用研究进展[J].中国药业,2003, 12(11):76.

[2]国 家 药 典 委 员 会.中 国 药 典 .一 部 [S].北 京:中 国 医 药 科 技 出 版社,2010:11.

[3]宋茹,袁继民,刘欣.高效液相色谱法测定三七药材中人参皂苷Rg1和三七皂苷R1的含量[J].中国现代应用药学杂志,2005,22(1):69.

[4]蓝义琨,何锦钧,李子鸿.复方三七口服液中三七皂苷R1和人参皂苷Rg1的含量测定[J].中国药业,2005,14(7):44.

HPLC Determination of Notoginsenoside R1 and Ginsenoside Rg1 in Dieda Cataplasm

CHEN Wen-zhu, YUAN Xiao-hong
(Guangdong Provincial Hospital of Traditional Chinese Medicine, Guangzhou 510120,China)

ObjectiveDetermine notoginsenoside R1 and ginsenoside Rg1 in Dieda cataplasm by HPLC.MethodsAgilent TC-C18ODS column was used with the mobile phase containing acetonitrile-water(24:76).The wavelength of detector was set at 203nm.The flow rate was 1mL/min.ResultsThe calibration curves were linear in the range of 0.583～29.15μg for notoginsenoside R1(r=0.9999, n=5) and 0.336～16.8μg for ginsenoside Rg1(r=0.9999, n=5). The recovery of notoginsenoside R1 was 99.9%～100.3%, and that of ginsenoside Rg1 was 99.8%～100.2%.ConclusionThe method is accurate, reliable and simple, and is suitable for the determination of Dieda cataplasm.

Dieda cataplasm; HPLC; Notoginsenoside R1; Ginsenoside Rg1

R282.710.3

：B

：1671-8194（2013）09-0062-02