张菊平, 黎 俊, 周大贵, 熊和琴, 吕 磊, 顾丽群

(毕节市农产品质量检验测试中心,贵州 毕节 551700)

磺胺类药物是1类具有广谱抗菌作用、价格低廉、性质稳定、使用方便的抗菌药,被广泛用于畜牧水产养殖业[1～3]。磺胺类药物具有潜在的致癌、致畸作用且半衰期较长[3,4],若养殖中大量长期使用会在动物产品中残留,影响消费者身体健康。为了保护人民群众免受药物残留带来的危害,我国制定了动物源食品中兽药最大残留限量,并将兽药残留检测列入国家监督管理计划[5]。目前鸡肉中磺胺类兽药残留的检测方法主要有高效液相色谱法[6,7]、超高效液相色谱-串联质谱法[8,9]、酶联免疫吸附法[10]等。本研究利用固相萃取-高效液相色谱紫外检测法对毕节市各县(市、区)2022年养殖的肉鸡进行磺胺类兽药残留检测分析。

1 材料与方法

1.1 样品来源

2022年1—12月,在毕节市各县(市、区)养殖场随机采集103批次鸡胸肌肉样品(七星关区14批次、大方县14批次、黔西市12批次、金沙县9批次、织金县14批次、纳雍县12批次、威宁县12批次、赫章县12批次、百里杜鹃管理区4批次),分别用高速组织捣碎机均质,四分法缩分后,每批次样品均分成3份,每份样品500 g,分别作为检样、留样、复检样,密封并标识,-20 ℃保存。

1.2 仪器与试剂

(1)多功能漩涡振荡器(型号:DMV-16,广东省科寅实验室设备有限公司)、离心机(型号:H1750R,湘仪离心机仪器有限公司)、高效液相色谱(型号:LC-20A,岛津公司)、分析天平(型号:WT5002K,常州万泰天平仪器有限公司)、旋转蒸发仪(型号:OSB-2200,上海爱朗仪器有限公司)、氮吹仪(型号:MTN-2800W,天津奥特赛思斯仪器有限公司)、MCX柱(60 mg/3 mL,美国Waters公司)。(2)7种高浓度标准溶液磺胺吡啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲氧哒嗪、磺胺醋酰、磺胺甲噁唑(均购自坛墨质检标准物质中心,浓度均为100 μg/mL),乙酸乙酯、正己烷、甲醇、乙腈(色谱纯,安徽天地高纯溶剂有限公司),氨水(优级纯,国药集团化学试剂有限公司),盐酸(优级纯)。

1.3 标准品溶液配制

分别取磺胺吡啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲氧哒嗪、磺胺醋酰、磺胺甲噁唑标准溶液逐级稀释配制混合标准中间液,每种标准品浓度均为1 μg/mL,储于棕色试剂瓶中备用。分别量取0.2、0.5、1.0、2.0、2.5 mL混合标准中间液至10 mL容量瓶,用0.1%甲酸乙腈定容,配制混合标准工作液,每种标准品浓度分别为0.02、0.05、0.1、0.2、0.25 μg/mL。

1.4 样品的前处理

(1)称取鸡胸肌肉样品(5.00±0.05)g于50 mL离心管中,加入乙酸乙酯10 mL,漩涡震荡2 min,10 000 r/min 离心5 min,取上清液,重复提取残渣1次,合并2次上清提取液于100 mL鸡心瓶中,加入 0.1 mol/L盐酸4 mL,于40 ℃水浴旋转蒸发,浓缩至 <3 mL,转移至10 mL离心管,用0.1 mol/L盐酸2 mL冲洗鸡心瓶,洗液转移至离心管,再用正己烷3 mL冲洗鸡心瓶,将正己烷洗液转移至同一离心管,涡旋混合30 s,10 000 r/min离心5 min,再次用正己烷3 mL冲洗鸡心瓶,洗液转移至同一离心管,涡旋混合30 s,10 000 r/min离心5 min,取下层液备用。(2)MCX柱依次用甲醇2 mL和0.1 mol/L盐酸2 mL于室温下活化2 min,备用液以流速1 mL/min过柱,依次用0.1 mol/L盐酸1 mL和50%甲醇乙腈溶液2 mL以流速1 mL/min冲洗,用5%氨水甲醇溶液4 mL以流速1 mL/min洗脱,收集洗脱液,于40 ℃水浴,氮气吹干,加0.1%甲酸乙腈溶液1.0 mL溶解残余物,0.22 μm滤膜过滤,得到制备样品液。

1.5 液相色谱分析条件

色谱柱:C18(150 mm×4.6 mm,粒径5 μm)。流动相:0.1%甲酸水溶液(A相)和乙腈(B相)。梯度洗脱程序:0～2 min,15%B;2～15 min,15%B～20%B;15～20 min,20%B;20～25 min,20%B～15%B。流速:0.8 mL/min。柱温:30 ℃。检测波长:270 nm。进样体积:50 μL。

2 结果与分析

2.1 7种兽药的液相色谱图

采用梯度洗脱模式,利用固相萃取-高效液相色谱紫外检测法有效分离了7种磺胺类兽药,获得了良好峰型(见图1～图3)。

图1 7种兽药标准溶液色谱图

图2 7种兽药阳性添加物色谱图

图3 空白鸡肉样品色谱图

2.2 实际样品检测情况

对2022年毕节市各县(市、区)103批次鸡肉样品的磺胺类兽药残留情况进行检测分析,结果见表1。有4批次样品检出磺胺类兽药残留(见图4～图7),分别为磺胺间甲氧嘧啶、磺胺甲噁唑、磺胺甲基嘧啶和磺胺醋酰,检出率分别为4%,超标率为0%。

表1 2022年毕节市肉鸡中7种磺胺类兽药检测结果

图4 第52批次样品色谱图

图5 第67批次样品色谱图

图6 第83批次样品色谱图

图7 第97批次样品色谱图

2.3 不同采样地区检出情况

大方县有1批次样品检出磺胺甲基嘧啶,检出率为7%(1/14);金沙县有1批次样品检出磺胺甲噁唑,检出率为11%(1/9);织金县有1批次样品检出磺胺间甲氧嘧啶,检出率为7%(1/14);威宁县有1批次样品检出磺胺醋酰,检出率为8%(1/12)。其余县(市、区)均无检出。

3 结论

2022年毕节市103批次鸡肉样品的磺胺间甲氧嘧啶、磺胺甲噁唑、磺胺甲基嘧啶、磺胺醋酰检出率分别为4%,超标率均为0,磺胺类兽药残留情况总体良好,但部分县(市、区)仍需严格控制磺胺类兽药的使用。

4 讨论

本研究采用固相萃取-高效液相色谱紫外检测法对毕节市2022年养殖肉鸡7种磺胺类兽药的残留情况进行检测,虽然总体情况良好,但仍有部分养殖户存在不规范使用此类兽药的情况。分析原因:一是在肉鸡养殖环节长期使用该类兽药或没有严格执行休药期制度;二是宣传、监管还不到位。为了严控兽药残留,养殖人员应严格按照说明书使用兽药,不得超期、超量使用,并严格执行休药期。相关职能部门应做好宣传工作,使养殖人员认识到兽药残留对人体和社会的危害,同时应加强监管,完善兽药追溯体系,加大抽检力度和处罚力度,保障肉食品安全。