乌蒙乌骨鸡 Myf5基因多态性与生长体重的关联分析

2024-01-02王文涛田旭玲张福平

贵州畜牧兽医 2023年6期

王文涛, 田旭玲, 张福平*

(1. 清镇市农业农村局,贵州清镇 551400;2. 贵州大学动物科学学院,贵州贵阳 550025)

乌蒙乌骨鸡是主产于贵州西北乌蒙山区毕节市、大方县、纳雍县、水城区等区域的地方特色家禽品种,因皮肤、肌肉、骨及内脏等均为乌黑色而得名,2009 年被列入中国家禽品种目录,是我国家禽品种基因库中具有较高经济价值的蛋肉兼用型品种,肉质鲜美细嫩,但生产性能比快大型杂交鸡低。Myf5基因是1类具有bHLH(碱性螺旋—环—螺旋)结构的转录因子,在动物早期胚胎中的表达与肌肉形成过程密切相关,其基因表达可促进动物胚胎期肌肉的形成,出生后表现为肌纤维长度增加和周径增大[1]。此外Myf5基因也在成肌细胞分化过程中起着重要的调控作用。基因敲除实验表明,小鼠的Myf5基因失活可导致其缺乏肌生成素,而未敲除Myf5基因的小鼠胚胎可以产生正常数量的成肌细胞[2]。目前畜禽育种繁殖领域对Myf5基因的研究主要集中在其与家畜周龄性状的关联性研究方面,与家禽周龄和繁殖性状相关的研究较少[3～5]。对松辽白鹅的研究揭示Myf5基因第1外显子发生单碱基突变形成3种基因型,不同基因型的宰前活重、屠体重、半净膛重、全净膛重、腿肌重等性状差异显著[6]。孙文浩[7]研究显示,自主培育的优质鸡Myf5基因第1外显子存在2个SNP位点,不同单倍型组合对肌纤维密度和直径具有显著影响(P<0.05)。本试验以乌蒙乌骨鸡为研究对象,探究Myf5基因突变位点与生长体重的关联性。

1 材料与方法

1.1 试验动物

在贵州省毕节市纳雍县种鸡场-贵州省地方鸡遗传资源库选取同批次、相同环境条件下饲养的18周龄乌蒙乌骨鸡100只(公、母各50只)作为试验鸡。

1.2 血样采集

用肝素钠抗凝采血管在翅静脉采血2 mL,放置于冰盒中暂存,带回实验室于 -80 ℃冰箱内保存备用,用于提取DNA。

1.3 主要试剂及仪器

(1)主要试剂:血清DNA提取试剂盒(型号:FG0309-A004,北京凡知公司)、DL 2 000 DNA Marker(上海生工生物工程技术服务有限公司)。(2)主要仪器:由贵州大学动物科学学院实验室提供(见表1)。

表1 试验用主要仪器

1.4 试验方法

1.4.1 DNA提取

用血清DNA提取试剂盒提取乌蒙乌骨鸡血液基因组DNA,置于 -20 ℃冰箱中保存备用。

1.4.2 引物设计

根据GenBank中鸡Myf5基因序列(登录号:NC052532.1),利用National Center for Biotechnology Information系统设计2对引物(见表2),用于扩增Myf5基因第1外显子。引物由北京擎科生物有限公司合成,离心后加入双蒸水溶解,保存于 -4 ℃冰箱中备用。

表2 引物信息

1.4.3 PCR 扩增

PCR反应体系25 μL:模板 DNA 2 μL,上、下游引物(10 μmol/L)各1 μL,Mix(10 mmol/L)21 μL。反应条件:98 ℃预变性2 min;98 ℃变性10 s,59 ℃退火10 s,72 ℃延伸12 s,共32个循环。扩增产物4 ℃保存。

1.4.4 DNA测序

用1%琼脂糖凝胶电泳(120 V,30 min)检测 PCR 产物,将特异性较好的扩增产物送至北京擎科生物有限公司测序。

1.4.5 体重测定

每只试验鸡每2周(初生、2周龄、4周龄、6周龄、8周龄、10周龄、12周龄、14周龄、16周龄、18周龄)使用检重秤测定早饲前的空腹体重,结果以“平均值±标准差”表示。

1.4.6 数据统计

利用SHEsis软件logistics回归法计算乌蒙乌骨鸡Myf5基因多态位点的基因型和等位基因频率、纯合度Ho、杂合度He、有效等位基因数Ne、多态性信息含量PIC,用SPSS 21.0软件卡方检验法进行Hardy-Weinberg平衡检验,并对Myf5基因多态位点进行配对连锁不平衡分析、不同基因型与周龄体重关联性分析。