黔产油麻血藤饮片质量标准研究

2023-08-22万力华杨从武邹大维谭霖

山东化工 2023年14期

万力华,杨从武,邹大维,谭霖

(黔东南州食品药品检验检测中心,贵州凯里 556011)

油麻血藤Caultsmucunaesempervirentis饮片是贵州省苗族、侗族等习用中药饮片。取原药材(常春油麻藤MucunasempervirensHemsl.的干燥藤茎),净制,浸润,切片,晒干,筛去灰屑或取片状药材,除去杂质,加工炮制即得。在贵州分布于黔东南州、黔西南州和黔南州等地。其性味甘、微苦、温,具有活血调经,补血舒筋等功效。用于月经不调、痛经、闭经、产后血虚、风湿痹痛、四肢麻木、跌扑损伤[1]。成分指标为:脂肪酸占1%～10%[2]、总黄酮类占12.43%[3]、酚类、蛋白质[4]、七个成分一致的挥发油(比较主要的包括3-辛醇、β-紫罗兰酮等)[5]。我省《贵州省中药材质量标准》2003版[1]收录其药材质量标准,而《贵州省中药饮片炮制规范》1986年版未对其收录,为控制油麻血藤饮片质量,本试验对10批次油麻血藤饮片性状鉴定;横切面、粉末显微特征进行鉴定;TLC对照药材定性鉴定;参照《中国药典》测定水分、总灰分、浸出物含量;UV测定总黄酮含量研究,为黔产油麻血藤饮片质量控制提供依据。

1 材料与仪器。

1.1 药材

10批样品收集于黔东南凯里、黔西南兴义等地,经黔东南苗族侗族自治州食品药品检验检测中心谭霖副主任药师鉴定,为油麻血藤Caults mucunae sempervirentis饮片,饮片信息见表1。

表1 10批饮片收集信息

1.2 仪器

紫外光度计UV-2600;莱卡DM500显微镜和LAS V3.8显像系统;5L-DK-98-ⅡA型数控电热恒温水浴锅单列六;DYF-500摇摆式高速中药粉粹机;XPE205型万分之一电子天平(梅特勒);玻璃仪器;SK8200HP—型数控超声波清洗器(500 W;53 kHz);鼓风烘箱。

1.3 材料

芦丁(中检院;92.4%;10080-201811;供UV含量测定用),硅胶G板(青岛胜海20170811);甲醇(川东化工试剂公司,AR),氢氧化钠、亚硝酸钠、硝酸铝,乙酸乙酯(川东化工试剂公司,AR),石油醚(60～90)、环己烷、甲酸等购自国药集团化学试剂公司,均为AR。

2 方法与结果

2.1 性状鉴定

本品为椭圆形、长矩圆形或不规则的厚片(斜切片),厚0.2～2.0 cm。表面极粗糙灰褐色至棕褐色,具横向疣状凸起皮孔。切面韧皮部具黑褐色树脂状分泌物,灰黄色木质部,孔洞状导管,放射状整齐排列,韧皮部与木质部相间排列呈数层同心性环,具不规则分布裂隙,髓部细小[1]。质坚韧,气微,味微涩而甜[1]。见图1。

图1 油麻血藤饮片性状图

2.2 横切面鉴定

木栓层由数列木栓细胞组成,含晶厚壁细胞在栓内层排列整齐,褐色或棕色物质多见,石细胞散在[1]。中柱鞘为石细胞和纤维组成的厚壁细胞环带,含草酸钙方晶并形成晶鞘[1]。维管系统异型,由多数维管束排列成数轮同心性环。韧皮射线宽至10 余列细胞;分泌细胞2～11 个相聚成切向条状,层状排列,韧皮纤维束多分布于韧皮部周围,形成纤维束鞘。形成层不明显[1]。木射线由非木化薄壁细胞组成,宽至10余列细胞;导管形大,多单个散在,纤维束为晶纤维,多分布于导管周围,少数散在于薄壁组织中[1]。髓由大型薄壁细胞组成,纹孔明显,环髓有少数分泌细胞及草酸钙方晶[1],见图2。

1.木栓层;2.皮层;3.石细胞群;4.中柱鞘;5.分泌细胞;6.韧皮射线;7.韧皮部;8.木质部;9.木质射线;10.导管;11.髓。图2 横切面显微鉴定图(10×10倍)

2.3 粉末鉴定

粉末为灰棕色。石细胞淡黄色或黄棕色,呈类圆形、类方形或类三角形,直径15～75 μm,层纹、孔沟明显,散在或成群。纤维成束或散在,直径7～20 μm,孔沟及胞腔明显,表面具斜纹理。草酸钙方晶多见,散在。晶纤维较多,成束,周围薄壁细胞中含多数草酸钙方晶。棕红色或棕黄色不规则块状分泌物多见。导管较大,多破碎,无色或黄棕色,为具缘纹孔导管。木栓细胞棕黄色至棕红色,多角形或类方形,排列紧密。见图3。

A.石细胞;B.草酸钙方晶;C.晶鞘纤维;D.木质纤维;E.木栓细胞;F.导管;G.棕色块。图3 粉末显微鉴定图(10×40倍)

2.4 薄层鉴定

取样品粉末约2.0 g,加乙醇40 mL,超声30 min,滤过,滤液蒸干,残渣加水10 mL溶解,用乙酸乙酯10 mL提取,挥干乙酸乙酯,残渣加甲醇1 mL溶解,即得。同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2020版四部通则0502)试验[6],取样品溶液5 μL、对照药材溶液5 μL,点于硅胶G薄层板上,在石油醚(60～90)-环己烷-乙酸乙酯-甲酸(体积比6∶3∶1∶0.2)体系中展开,取出,挥干,1%香草醛硫酸溶液,105 ℃下显色,见图4。

1.对照药材;2.S1饮片;3.S2饮片;4.S3饮片;5.S4饮片;6.S5饮片;7.S6饮片;8.S7饮片;9.S8饮片;10.S9饮片;11.S10饮片。图4 样品及对照药材TLC色谱图

2.5 水分检查

依照《中国药典》2020版第四部通则0832水分测定法(第二法烘干法)[6],分别取10批饮片样品测定水分。其值7.3%～9.0%,均值为8.1%,见表2。

表2 10批次饮片水分测定结果(n=2)

2.6 总灰分检查

依照《中国药典》2020版第四部通则2302[6],分别取10批次饮片样品测定总灰分。其值5.5%～7.3%,均值为6.4%,见表3。

表3 10批次饮片总灰分测定结果(n=2)

2.7 浸出物检查

用水作溶剂,按《中国药典》2020版第四部通则2201热浸法[6],取10批次饮片样品测定,以干燥品计算浸出物的含量,其值19.0%～22.1%,均值为20.4%,见表4。

表4 10批次饮片样品浸出物测结果

2.8 含量测定

2.8.1 标准溶液的制备

精密称取标准物质11.75 mg(芦丁),用85%甲醇适量,超声充分溶解为217.14 μg/mL标准溶液。

2.8.2 标准曲线的制备

量取2.6.1项下溶液1.0,2.0,3.0,4.0,5.0,6.0 mL,各置25 mL量瓶中,各加水至6 mL,加5%亚硝酸钠溶液1 mL,摇匀,放置6 min[7],加10%硝酸铝溶液1 mL,摇匀,放置6 min[10],加氢氧化钠试液10 mL,再加水至刻度,摇匀,放置15 min[7],即得。立即在 510 nm 处测定各个溶液的吸光度,绘制标准曲线[8]。其回归方程为Y=0.013 794 4X-0.019 471 4,r=0.999 65,在测定浓度为8.685 6～52.113 6 μg/mL范围内线性关系良好,可以进行定量分析[12]。

2.8.3 样品溶液的配制

精密称取粉末约0.25 g,置具塞锥形瓶,加85%甲醇 100 mL,称重,超声30 min,冷却再称重,用85%甲醇进行补重,摇均匀之后进行过滤操作,取续滤液 5.00 mL置 25 mL 量瓶中,照2.7.2项下方法,从“加水至6 mL”起依法操作,并测定吸光度,从标准曲线上读出供试品溶液中芦丁浓度[9]。

2.8.4 样品含量测定

精密称取10批次饮片样品粉末各2份,照2.7.3项下依法操作,计算总黄酮量,10批饮片样品总黄酮测定结果6.2%～9.2%,平均值为8.0%,见表5。