孔祥伟,尹 伟,王晨辰,张 林,程义成

牙周膜干细胞(periodontal ligament stem cells,PDLSCs)在牙周组织再生修复中发挥重要作用[1]。然而,炎症PDLSCs的再生功能受损,给牙周炎患者使用自体PDLSCs治疗带来困难[2-3]。细菌感染和慢性炎症会导致细胞发生表观遗传修饰的改变,从而导致再生能力的下降。去乙酰化酶1(Sirtuin 1,Sirt1)在多细胞有机体中广泛存在,通过将组蛋白去乙酰化,参与多种生命过程[4]。Sirt1也是骨密度的重要调节因子[5]。但Sirt1对炎症PDLSCs成骨分化的影响及其机制尚未见相关研究报道。该研究在炎症PDLSCs成骨诱导过程中使用Sirt1激动剂白芦藜醇上调细胞中的Sirt1,观察Sirt1对炎症PDLSCs成骨分化的影响;同时,检测叉头框蛋白O(forkhead box O protein,FoxO)和核内转录调节因子κB(nuclear factor-κb,NF-κB)的表达,明确Sirt1调控炎症PDLSCs的分子机制可以为恢复疾病状态下干细胞的再生能力提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 主要试剂与仪器DMEM 培养基、胎牛血清、青霉素、链霉素、PBS(美国Gibco公司);I型胶原酶、胰蛋白酶、β-甘油磷酸钠、地塞米松、LPS(美国Sigma公司);白芦藜醇(美国Selleckchemicals公司);谷氨酰胺、TRIzol Reagent(美国Invitrogen公司);BCIP/NBT碱性磷酸酶染色试剂盒、RIPA细胞裂解液、Bradford蛋白浓度测定试剂盒(上海碧云天生物技术有限公司);逆转录试剂盒、实时荧光定量PCR试剂盒(日本Takara公司);Sirt1抗体、Runx2抗体(美国Cell Signaling公司);乙酰化NF-κB抗体、乙酰化FoxO1抗体、FoxO1抗体(美国Abcam公司);β-actin抗体(江苏康为世纪生物技术有限公司);ECL发光试剂盒(美国Pierce公司);7500型快速实时荧光定量PCR仪(德国Applied Biosystems公司);倒置相差显微镜(日本Olympus公司);JS-860A自动凝胶成像仪(上海培清科技有限公司)。

1.2 正常与炎症PDLSCs的分离和培养正常PDLSCs来自于健康个体,年龄20～35(28.00±3.53)岁;炎症PDLSCs来自于慢性牙周炎患者,年龄31～40(35.00±4.27)岁。……