夏兆新,杨文苏,朱 毅,胡心益,林春晖,蒋 童,沈继录

肺炎克雷伯菌是重要的院内感染病原体,其耐药性在全球范围内不断增加,且治疗药物愈发受限,是重大的公共卫生问题之一[1]。替加环素和多黏菌素是治疗这些致病菌感染的重要药物[2-3]。然而随着其在临床抗感染治疗中的逐渐使用,近年来也不断有对其耐药的菌株被分离出来[4-5]。CHINET数据[6]显示,2021年肺炎克雷伯菌的替加环素耐药率为4.2%,中介率为7.0%,而多黏菌素在克雷伯菌属中的耐药率也达到3.9%。目前临床上常用纸片扩散法,或基于微量肉汤稀释法来检测替加环素和多黏菌素的敏感性,然而其操作繁琐,耗时长,可能会延误治疗。为了优化替加环素和多黏菌素的使用,该研究基于基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)技术[7-8]进行直接靶板微滴生长法(direct-on-target micro-droplet growth assay,DOT-MGA),预测替加环素和多黏菌素的敏感性,评估数小时内快速检测肺炎克雷伯菌耐药表型的可行性和准确性。

1 材料与方法

1.1 菌株来源共收集安徽医科大学第一附属医院临床分离的肺炎克雷伯菌67株,其中27株对替加环素耐药菌,13株对多黏菌素耐药,27株对两种抗生素敏感。所有菌株均经过MALDI-TOF MS(德国Bruker公司)鉴定,确定菌种。

1.2 材料与试剂MALDI-TOF MS质谱仪,质谱样品处理基质液及MALDI-TOF MS靶板均购自德国Bruker公司;替加环素、多黏菌素和CAMHB肉汤粉末(阳离子调节肉汤)购自北京索莱宝科技有限公司;哥伦比亚血琼脂平板购自上海科玛嘉微生物技术有限公司;ATCC27853和ATCC25922作为微量肉汤稀释法和MALDI-TOF MS鉴定所用的标准菌株,为安徽医科大学第一附属医院微生物实验室所保存。……