张 昕,李长顺,刘 浩,朱绍跃,周 猛,冯 岩,张光东

人牙龈成纤维细胞(human gingival fibroblasts,HGFs)是牙周组织工程常用的种子细胞[1]。已证实HGFs具有多向分化的潜能,可在不同诱导条件下分化为骨细胞、平滑肌样细胞以及内皮样细胞等[2]。人参是一种传统中药材,人参皂苷Rg1(ginsenoside Rg1,GsRg1)是其主要活性成分之一,具有抗炎、抗氧化等功能[3]。研究[4]发现GsRg1可调控间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)的增殖、分化、衰老、凋亡,从而影响机体组织修复。Yin et al[5]研究发现,GsRg1可促进牙周膜干细胞(periodontal membrane stem cells,PDLSCs)增殖,增加碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)的活性及骨桥蛋白(osteopontin,OPN)和骨钙素(osteocalcin,OCN)等蛋白的表达,从而促进PDLSCs的成骨向分化。然而GsRg1对HGFs增殖、迁移以及成骨机制的研究尚未见报道。因此,该研究探讨GsRg1对HGFs增殖、迁移的影响,并验证GsRg1对HGFs成骨方向分化的影响,初步探索其可能的作用机制,为GsRg1用于牙周组织修复再生及牙周病的治疗提供了实验依据。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂GsRg1单体(纯度98%,微科曼得生物工程有限公司);DMEM高糖培养基、DAPI染色试剂盒(江苏凯基生物技术股份有限公司);胎牛血清(杭州四季青生物工程材料有限公司);I型胶原蛋白酶、Dispase Ⅱ(美国Gibco公司);CCK-8试剂盒、Triton X- 100、正常山羊血清、青-链霉素双抗(微科曼得生物工程有限公司);Vimentin抗体、Cytokeratin17抗体、488荧光标记红色山羊抗兔子IgG(美国Proteintech公司);Transwell过滤器培养板(美国BD公司),倒置光学显微镜(日本Nikon公司);磷酸盐缓冲液(上海碧云天生物技术有限公司);0.25%胰酶细胞消化液(微科曼得生物工程有限公司);兔抗β-actin抗体、兔抗PI3K抗体、兔抗p-PI3K抗体、兔抗AKT抗体、兔抗p-AKT抗体(上海碧云天生物技术有限公司);兔抗OCN抗体,兔抗I型胶原蛋白(collagen-Ⅰ,COL-Ⅰ)抗体,兔抗OPN抗体(美国Abcam公司)。……