高海洋,何海兰,张立国,陈 曦,李治国

肾间质纤维化是许多进行性慢性肾脏疾病的共同途径,最终导致终末期肾衰竭,其发病机制十分复杂,主要特征是细胞外基质沉积、成纤维细胞积累、炎性细胞浸润等[1-3],目前缺乏有效治疗方法。因此,探讨肾间质纤维化的发病机制,对于预防和减轻肾间质纤维化具有重要意义。醌型二氢生物喋呤还原酶(quinoid dihydropteridine reductase,QDPR)在体外研究中发现有抗纤维化作用,过表达QDPR能减少转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)的表达[4],提示其在肾间质纤维化中有重要作用。据报道,QDPR这一作用可能与自噬相关[5]。自噬是一种高度保守的细胞行为[6],其在单侧输尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction,UUO)大鼠模型肾纤维化过程中起到双重作用[7-9]。自噬诱导肾小管萎缩和分解,从而促进纤维化[9],又可能通过抑制上皮间质转化进而抑制纤维化[8]。此外,研究[10]发现Beclin1是自噬过程的关键调节因子之一。因此,该研究拟通过构建过表达QDPR的UUO模型,探讨QDPR是否通过调控Beclin1的表达进而调控肾间质纤维化,为肾间质纤维化发病机制的研究提供新的思路。

1 材料与方法

1.1 主要试剂慢病毒由华北理工大学李治国教授课题组自制;QDPR抗体、α-SMA抗体(美国Proteintech公司);COL Ⅰ(武汉博士德生物工程有限公司);E-Cadherin (ECa)抗体、Beclin1抗体(美国Proteintech公司);山羊抗兔抗体(英国Abcam公司);枸橼酸三钠、柠檬酸(天津大茂化学试剂厂);DAB(德国Sigma公司);Masson染色试剂盒(珠海贝索生物科技有限公司)。

1.2 实验动物3周龄,雄性健康清洁(SPF)级的SD 大鼠[北京维通利华实验动物技术有限公司,实验动物的生产许可……