郭静宜,原 翔,石林林,张秀森,孔金玉,张顶彧,高社干

食管癌(esophageal cancer,EC)是恶性程度较高的消化系统肿瘤[1],常见组织学类型为食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)[2]。牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonasgingivallis,Pg)是一种革兰阴性厌氧菌,可以通过其毒力因子引起宿主免疫功能异常,成为肿瘤潜在危险因素[3]。本课题组前期研究[4]表明,Pg与ESCC的发生发展具有正相关性。巨噬细胞是机体固有免疫的重要组成部分之一,可塑性极强,在肿瘤微环境(tumor microenvironment,TME)中不同因素影响下会分化为不同亚群,具备不同的功能,参与调控肿瘤组织免疫反应。巨噬细胞主要分两种表型:M1抗肿瘤型和M2促肿瘤型[5]。肿瘤相关巨噬细胞(tumor associated macrophages,TAMs)是肿瘤组织中浸润的巨噬细胞,是TME中最丰富的细胞之一[6]。现有研究多为TAMs如何调控癌症的侵袭迁移,对肿瘤细胞如何影响巨噬细胞极化的机制研究尚未明确。该研究首次通过探寻Pg感染ESCC细胞对巨噬细胞极化及其功能变化的影响,探讨ESCC发病机制,为ESCC病因学提供数据支持,为免疫治疗提供潜在靶点。

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1细胞与细菌 人ESCC细胞株KYSE140、KYSE150购自中国科学院细胞库;人单核细胞白血病细胞株(THP-1)购自武汉普诺赛生命科技有限公司;标准Pg菌株来源于ATCC细胞库。

1.1.2主要试剂 PMA购自美国Sigma公司;白细胞介素(interleukin,IL)-4购自美国PeproTech公司。RPMI-1640培养基、FBS、胰蛋白酶均购自美国Gibco公司;青-链霉素购自北京索莱宝科技有限公司;β-巯基乙醇购自武汉普诺赛生命科技有限公司;CD11b-FITC购自美国Thermo Fisher公司、CD68-BV421购自美国BD公司、CD206-PE购自美国Biolegend公司。引物由金唯智生物科技有限公司合成。……