胡冰琪,周 静,黄俊峰,陈礼文

肺癌是癌症相关死亡的主要原因之一,转移作为肺癌发展的关键阶段,与70%以上的死亡有关[1]。上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)是上皮细胞获得间质特征的过程。在癌症中,EMT与肿瘤起始、侵袭、转移和治疗耐药性相关[2]。血管生成拟态(vasculogenic mimicry,VM)是近年来在许多恶性肿瘤中发现的一种血管生成过程,涉及由肿瘤细胞组成的微血管通道的形成。因此,VM被认为是侵袭性肿瘤血管形成的新模型,可以为肿瘤生长提供血液供应[3]。

双氢青蒿素(dihydroartemisinin,DHA)是青蒿素的第一代衍生物,因其疗效好、毒性低等特点,被用于临床抗疟治疗[4]。近年来,研究表明双氢青蒿素在肝癌[5]、卵巢癌[6]、胰腺癌[7]等多种肿瘤中起抗癌作用。但在肺癌中,DHA是否发挥抗癌效应及其可能的抗癌机制还有待探究。该研究使用DHA处理非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)A549和H3255细胞来检测对EMT过程中E-cadherin、N-cadherin、Vimentin和VM的标志物VE-cadherin表达的影响,并采用一系列细胞功能实验探讨DHA对NSCLC细胞的转移侵袭和VM的可能作用机制。

1 材料与方法

1.1 实验材料A549、H3255细胞采购于上海富恒生物技术有限公司;RPMI1640培养基和胎牛血清购于美国Gibco公司;0.25%胰酶消化液、1%青-链霉素、CCK8试剂和RIPA裂解液购于上海碧云天生物技术有限公司;总RNA提取试剂盒购于新贝(上海)生物科技有限公司;E-Cadherin 抗体购于美国Affinity Biosciences公司;N-Cadherin 抗体购于美国 Cell Signaling Technology公司;Vimentin抗体、VE-Cadherin抗体购于英国 Abcam公司;山羊抗兔(H+L) HRP和山羊抗小鼠(H+L) HRP 购于美国 Affinity Biosciences公司;Western blot显影仪购于上海天能科技有限公司;Matrigel Matrix 基质胶和Transwell小室购于美国 Corning公司。

1.2 实验药物DHA(纯度>97%)购于美国Selleck公司、DMSO购于上海碧云天生物技术有限公司,DHA用DMSO充分溶解配成100 mmol/L的母液,水浴锅50 ℃水浴助溶,-20 ℃保存。在……