顾季炜,施 梅,宋国齐

弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B cell lymphoma,DLBCL)是起源于生发中心的,是非霍奇金淋巴瘤(non-hodgkin lymphoma,NHL)中最常见的一种类型[1]。利妥昔单抗联合环磷酰胺、多柔比星、长春新碱和泼尼松(rituximab,cyclophosphamide,doxorubicin,vincristine,and prednisone,R-CHOP)方案大约能治愈60%的DLBCL患者,其余患者则会出现难治或复发[2]。因此,研究利妥昔单抗获得性耐药的机制具有重大意义。m6A是腺苷N6位发生甲基化,是一种转录后修饰,在癌症发生、发展及耐药中发挥重要的作用[3]。研究[4]表明,MYC基因易位相关的 DLBCL与 R-CHOP 治疗的低生存率相关,这表明MYC可能与DLBCL利妥昔单抗耐药存在相关性。脂肪量和肥胖相关蛋白(fat mass and obesity-associated protein,FTO)是一种去甲基化酶[5],在急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)中R-2-羟基戊二酸(R-2-hydroxyglutarate,R-2HG) 通过靶向FTO/m6A/MYC/CEBPA 信号传导,抑制了癌细胞增殖,发挥抗肿瘤作用[6]。甲氯芬酸钠(meclofenamic acid,MA)可结合 FTO 的活性表面,选择性抑制 FTO 介导的 m6A去甲基化,减少胶质母细胞瘤干细胞的增殖[7]。该研究旨在探讨FTO及其抑制剂MA通过MYC、CEBPA影响DLBCL利妥昔单抗的耐药机制。

1 材料与方法

1.1 试剂与仪器RPMI-1640培养基、胎牛血清(美国Gibco公司);健康人血浆(南通大学附属医院健康体检者);SDS-PAGE凝胶配制试剂盒、CCK-8试剂盒(日本DojinDo公司);AnnexinV-FITC/PI双染细胞凋亡试剂盒(江苏凯基生物技术股份有限公司);利妥昔单抗注射液(上海罗氏制药有限公司);兔抗人FTO单克隆抗体(美国Santa Cruz Biotechnology公司);兔抗人c-Myc单克隆抗体、兔抗人CEBPA单克隆抗体、兔抗人GAPDH单克隆抗体(美国Cell Signaling Technology 公司);引物由广州市锐博生物技术有限公司设计及合成;Trizol试剂(南京诺唯赞生物科技股份有限公司);酶联仪(美国Biotek公司);流式细胞仪(美国BD公司);蛋白免疫印迹电泳设备及化学发光成像系统(美国Bio-Rad公司);QuantStudio5荧光定量PCR 仪(美国Thermofisher 公司)。……