陆海青,李艳丽,华兹涵,肖佳欣,凌 博,叶广彬

中医药防治肺癌广泛应用于临床,且在疗效和预后中具有其独特的优势[1-2]。以苦杏仁为核心组方药物的薯蓣丸、清气化痰丸和益肺清化膏,均可明显改善肺癌患者的临床疗效,尤其在增强患者放化疗的疗效、缓解咳喘等临床症状和提升生活质量方面优势明显[3-4]。研究[5-7]表明,苦杏仁苷是苦杏仁抗肿瘤的核心有效成分,苦杏仁苷抗肿瘤的部分作用是由其催化产物所实现的,如肿瘤细胞无法代谢氢氰酸(苦杏仁苷催化产物),故诱导肿瘤细胞凋亡。但是,同为苦杏仁苷催化产物的扁桃酸,在肺腺癌中的作用及机制尚不清楚。该研究以不同浓度扁桃酸干预肺腺癌H1299细胞,分析肺腺癌细胞增殖、凋亡和迁移能力的变化,聚焦相关通路蛋白的检测,从而整体分析扁桃酸抗肺腺癌细胞的作用和机制,继而为苦杏仁及苦杏仁苷对肿瘤治疗的临床应用提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 实验材料人肺腺癌H1299细胞购于中国科学院细胞库。基础培养基DMEM、10%胎牛血清(美国Gibco公司)制备完全培养基,0.25%胰蛋白酶(美国Gibco公司)用于细胞消化。扁桃酸购于美国Sigma公司,用DMSO溶解,制备成母液(500 μg/ml),进行滤膜过滤除菌除杂质,再用培养基稀释成不同浓度备用。CCK-8试剂购于中国Biosharp公司;Hoechst 33258和PI试剂购于北京索莱宝科技有限公司;Matrigel基质胶和Transwell小室购于美国BD公司;Western blot实验基础试剂:SDS-PAGE凝胶试剂盒、BCA检测试剂盒和ECL超敏显影试剂盒购于上海碧云天生物技术有限公司;stat3、p-stat3、bax、bcl-2、caspase-3、cl-caspase-3、MMP-9、Vimentin和β-tubulin单克隆抗体均购于艾博抗(上海)贸易有限公司。……