岳彩云 田龙

1成武县人民医院病理科，菏泽 274200；2成武县人民医院乳甲外科，菏泽 274200

甲状腺结节为临床较为常见的内分泌系统多发性肿瘤，随高频超声的应用其检出率逐渐提高［1］。报道显示，甲状腺癌占所有癌症发病率中第9位，而甲状腺结节在体检人群中检出率约为50%，其中甲状腺恶性肿瘤发病率约15%［2］，对患者生命安全造成严重威胁，因此，及时评估甲状腺结节性质、制定有效干预方案至关重要。超声引导下细针抽吸活检（ultrasound-guided fine needle aspiration biopsy，US-FNAB）为目前临床评估甲状腺结节的主要方法之一，具有微创、敏感度高等优点，但经相关数据统计发现，仍有10%～20%甲状腺结节无法通过US-FNAB明确其性质［3-4］。近年来，基因水平已成为肿瘤标志物检测指标，其中丝/苏氨酸特异性激酶基因V600E（BRAF V600E）为甲状腺癌常见生物学突变位点，且该突变点仅存在于恶性结节中，因此，推测其可作为甲状腺结节术前诊断的标志物［5-6］。目前，临床关于二者联合应用于甲状腺结节定性诊断的相关研究鲜有，基于此，本研究试分析BRAF V600E基因突变检测联合US-FNAB对甲状腺结节的诊断价值及临床意义。

资料与方法

1.一般资料

选取2019年8月至2022年8月在成武县人民医院就诊的90例疑似恶性甲状腺结节患者作为研究对象，其中男51例，女 39例，年龄 32～68（56.27±2.84）岁；体质量指数20.2～26.2（23.17±1.15）kg/m2；结节长径 3.0～28.0（17.35±1.35）mm。

本研究经成武县人民医院医学伦理委员会审批通过（2022047）。

2.入选标准

（1）纳入标准：均经超声检查初步判定为疑似恶性甲状腺结节患者；均为单发结节；可接受本研究检查方案；患者及家属知晓本研究，并签订知情同意书。（2）排除标准：非首次行甲状腺手术；合并其他甲状腺疾病；合并其他恶性肿瘤；既往存在远端转移及头颈部放射治疗史；入组前3个月内服用抗甲状腺药物治疗；合并心、肺、肝、肾功能障碍；合并全身性感染疾病、造血系统疾病。

3.方法

BRAF V600E基因检测：采集所有患者静脉血500 μg，经抗凝处理后提取DNA，BRAF基因第15号外显子序列PCR扩增，采用武汉生源科技公司BRAF基因突变检测试剂盒，经DNA测序法行PCR产物DNA序列双向测序，采用美国ABT7500型全自动荧光定量PCR仪分析基因突变性质，分批上样重复试验，获取突变信号或内控信号荧光阈值循环数（Ct），基因检测结果分为野生型及突变型，其中野生型：Ct≥26，突变型：Ct<28，野生型判定为恶性。

US-FNAB：均采用美国GE E8型彩色多普勒超声诊断仪检查甲状腺结节，探头频率为5～10 MHz，引导患者处仰卧位，充分暴露颈部，明确最佳穿刺部位及深度，局部麻醉处理后，采用23G针头连接10 ml注射器，超声引导下避开神经、大血管及气管等重要部位，全程密切关注穿刺位置及方向，维持穿刺针处于负压状态，通过改变穿刺针方向反复提插5次以上，消除负压后拔出针头，压迫穿刺点止血10 min。根据US-FNAB结果进行分类，其中Ⅰ类：标本无法诊断；Ⅱ类：良性病变；Ⅲ类：意义不明确的非典型病变；Ⅳ类：滤泡性肿瘤；Ⅴ类：可疑恶性肿瘤；Ⅵ类：恶性肿瘤。

4.观察指标

（1）比较BRAF V600E基因突变检测、US-FNAB单独、联合诊断结果，联合诊断结果采用并联原则。（2）比较BRAF V600E基因突变检测、US-FNAB单独、联合诊断效能，包括灵敏度、特异度、准确率、漏诊率、误诊率、阳性预测值、阴性预测值。（3）比较不同甲状腺结节长径患者BRAF V600E基因突变类型、US-FNAB分类。

5.统计学方法

采用SPSS 23.0软件进行数据处理分析，用EXCEL软件建立数据库，常规进行逻辑检错，经K-S检验确认具备方差齐性的计量资料用均数±标准差（）表示，计数资料用例（%）表示，行χ2检验，P<0.05表示差异有统计学意义。

结 果

1.BRAF V600E基因突变检测、US-FNAB单独诊断结果（表1）

表1 90例疑似恶性甲状腺结节患者BRAF V600E基因突变检测、US-FNAB单独诊断结果（例）

经手术或病理活检结果显示，90例疑似恶性甲状腺结节患者中，恶性62例，良性28例。经BRAF V600E基因突变检测诊断结果显示，恶性51例，良性39例；经US-FNAB结果显示，恶性50例，良性40例。

2.BRAF V600E基因突变检测、US-FNAB联合诊断结果（表2）

表2 90例疑似恶性甲状腺结节患者BRAF V600E基因突变检测、US-FNAB联合诊断结果（例）

经BRAF V600E基因突变检测、US-FNAB联合诊断结果显示，90例甲状腺结节患者中，恶性61例，良性29例。

3.BRAF V600E基因突变检测、US-FNAB诊断效能比较（表3）

表3 90例疑似恶性甲状腺结节患者BRAF V600E基因突变检测、US-FNAB单独及联合诊断效能比较（%）

与BRAF V600E基因突变检测、US-FNAB单独诊断比较，联合诊断灵敏度、准确度均较高，漏诊率较低，差异均有统计学意义（均P<0.05）。

4.不同甲状腺结节长径患者BRAF V600E基因突变类型比较（表4）

表4 不同甲状腺结节长径患者BRAF V600E基因突变类型[例（%）]

经手术或病理活检结果显示，90例甲状腺结节患者中，长径≤5 mm 20例、5～10 mm 48例、>10 mm 22例，不同甲状腺结节长径患者BRAF V600E基因突变类型比较差异无统计学意义（P>0.05）。

5.不同甲状腺结节长径患者US-FNAB分类比较（表5）

表5 不同甲状腺结节长径患者US-FNAB分类比较[例（%）]

经US-FNAB检查结果显示，90例甲状腺结节患者中Ⅱ类9例、Ⅲ类8例、Ⅳ类10例、Ⅴ类13例、Ⅵ类50例，不同甲状腺结节长径患者US-FNAB检查Ⅲ类、Ⅵ类差异均有统计学意义，其中Ⅵ类更为显著（均P<0.05）。

讨 论

甲状腺结节为不同病因引起的甲状腺内部产生单一或多个组织结构病变的肿块，随着目前体检人群数量不断增加，甲状腺结节检出率随之升高，因此早期明确甲状腺结节性质、针对性制定干预方案至关重要［7-8］。

US-FNAB为目前临床评估甲状腺结节主要方案之一，可通过超声仪器显示屏实时观察画面，能将穿刺针沿预设好的路径在甲状腺结节内部多次抽吸取样，有效降低穿刺标本非诊断率，具有简便快捷、安全、微创等优点［9-11］。本研究结果显示，US-FNAB对甲状腺结节恶性诊断灵敏度为77.42%（48/62），特异度为92.86%（26/28），准确度为82.22%（74/90），具有一定诊断价值。US-FNAB虽具有较高诊断准确率，但也存在一定局限性，抽取的组织细胞中无法完全代表病灶组织，可掺杂正常血液细胞，且部分病灶无法从细胞形态明确性质，因此单独采用US-FNAB无法准确判定甲状腺结节性质，可联合其他方案进行评估［12-14］。

BRAF V600E基因为RAF基因家族之一，在细胞生长分裂、细胞分化及细胞增殖方面发挥重要作用，其所编码的激酶存在于细胞质内，可有效诱导活化MAPK信号通路［15-16］。本研究结果显示，BRAF V600E基因突变检测联合US-FNAB诊断灵敏度（95.08%）、准确度（94.38%）均显著高于单独诊断，可有效降低漏诊率。报道显示，BRAF V600E基因可通过突变导致BRAF蛋白激活，引起下游MEK蛋白磷酸化，最终导致MAPK信号持续激活，引起细胞过度增殖、分化及肿瘤形成［17-19］。国内学者研究表明，甲状腺乳头状肿瘤中BRAF V600E基因突变阳性率可达58%～86%，而甲状腺良性结节及正常组织中均未发现突变［20-21］。据此可进一步证实BRAF V600E基因突变检测对甲状腺结节性质的评估价值，提示临床可通过BRAF V600E基因突变检测联合US-FNAB检查对早期甲状腺结节定性诊断。有研究表明，US-FNAB穿刺准确度与甲状腺结节长径可能存在一定联系，穿刺长径越小，超声引导下定位取样越困难［22-23］。张秋霞和张占超［24］以甲状腺结节6 mm为标准，发现长径<6 mm的US-FNAB穿刺不满意度高达25.3%。本研究结果显示，不同甲状腺结节长径患者BRAF V600E基因突变类型比较差异均无统计学意义，而US-FNAB检查Ⅲ类、Ⅵ类存在差异，且Ⅵ类更为显著，说明US-FNAB检查对于甲状腺恶性结节具有较高敏感度。

综上所述，BRAF V600E基因突变检测、US-FNAB检查对于甲状腺结节均具有较高诊断价值，临床可通过联合应用早期定性诊断，以制定相应干预方案。

利益冲突所有作者均声明不存在利益冲突

作者贡献声明岳彩云：酝酿和设计试验，实施研究，采集数据，分析/解释数据，撰写文章，工作支持；田龙：酝酿和设计试验，实施研究，采集数据，分析/解释数据，撰写文章，统计分析