张 兵,王孝玉,朱亚辉

类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是临床常见的一种系统性自身免疫性疾病,随着疾病的发展病人关节骨与软骨组织逐渐被破坏,甚至致使病人残疾,研究[1-2]发现滑膜成纤维细胞过度增殖及迁移可促进RA的发展。环状RNA(circular RNA,circRNA)是由5′端与3′端以共价键结合形成的一种环状RNA分子,其在RA或滑膜成纤维细胞中表达异常,并可能调控细胞增殖及转移等过程[3-4]。circPTPRA高表达可促进动脉粥样硬化的发生及发展[5]。但circPTPRA与RA的相关研究尚鲜见报道。生物信息学预测显示circPTPRA与miR-140-5p存在结合位点,研究[6]表明miR-140-5p在RA滑膜成纤维细胞中表达下调,其可抑制细胞增殖及炎性因子的分泌。但circPTPRA/miR-140-5p分子轴在RA发生发展过程中的作用机制尚未阐明。因此,本研究主要探讨circPTPRA通过靶向调控miR-140-5p而影响RA滑膜成纤维细胞增殖及转移。

1 材料与方法

1.1 研究对象 选取2019年10月至2020年1月期间于本院关节外科行膝关节置换术的26例RA病人为研究对象,所有病人均符合2010ACR/EULAR颁布的类风湿关节炎分类标准,其中男16例,女10例,年龄52～67岁,平均年龄(58.59±7.46)岁,术中切除滑膜组织置于-80 ℃冰箱内保存。选取同期于本院接受关节手术的外伤病人26例为对照,所有病人均为外伤所致且均未患有RA,其中男16例,女10例,年龄45～66岁,平均年龄(57.26±3.25)岁。

1.2 主要试剂 DMEM培养液与胎牛血清购自美国Gibco;MTT、DMSO购自美国Sigma;Lipofectamine2000、Transwell小室购自北京索莱宝;Trizol试剂购自美国Invitrogen;逆转录试剂及qRT-PCR试剂均购自美国Thermo Fisher;si-NC、si-circPTPRA、miR-NC、miR-140-5p mimics、anti-miR-NC、anti-miR-140-5p购自广州锐博生物;pcDNA3.1、pcDNA-circPTPRA购自上海吉玛;兔抗人CyclinD1、MMP2、MMP9与二抗购自美国CST。

1.3 方法

1.3.1 原代分离培养RA滑膜成纤维细胞 取出病人……