吴宣宣,张俊丽,商 玲,燕善军,武文娟

尽管近年来肝癌的治疗出现了新的靶向治疗和免疫疗法[1],但肝癌仍是全世界最普遍的致命性恶性肿瘤,其治疗方法包括手术、经动脉化学栓塞、化学药物治疗、放射疗法以及肝移植等。病人确诊时多为晚期,常用细胞毒性抗肿瘤药物治疗如顺铂(cisplatin,DDP)。化学治疗已应用多年,但易出现耐药性仍是它的一个缺点,所以联合一些能提高化疗敏感性的小分子物质可能是一种有效的治疗方案。低分子质量肝素(low molecular weight heparin,LMWH)是相对分子质量3 000～8 000的一组肝素片段,也是临床上首选的抗凝药[2],LMWH在其他方面也有不错的作用:可抑制肿瘤细胞的血管生成和转移[3];可通过影响wnt信号通路抑制A2780卵巢癌细胞对DDP耐药性的基因表达,逆转DDP的耐药性[4]。细胞自噬是一种进化保守并可降解多余的细胞内物质和细胞器的自杀方式。NASSOUR等[5]发现自噬通过促进细胞死亡可有效阻止癌症的发生。有研究[4]表明LMWH联合化疗药物可增加自噬水平而导致癌细胞的死亡。本实验旨在探讨LMWH与 DDP联合作用对BEL-7404肝癌细胞自噬的影响及其分子机制,为肝癌的治疗提供参考。

1 材料与方法

1.1 细胞培养 人肝癌BEL-7404细胞株,由蚌埠医学院临床检验诊断学实验中心保存,在有10%胎牛血清和1%双抗的RPMI 1640培养基中、37 ℃、5%CO2温箱里培养,取对数生长期细胞用于后续实验。

1.2 主要试剂 RPMI 1640培养基、胎牛血清(Gibco,美国);CCK-8试剂盒(赛国公司);RIPR裂解液、BCA蛋白定量试剂盒(碧云天公司);SDS-PAGE凝胶配制试剂盒、三色预染蛋白marker(雅酶公司);MDC染……