李依霖，叶军，何连栋，王嘉俊，许顺

（中国医科大学附属第一医院胸外科，沈阳 110001）

肺癌是目前全球范围内第二高发的癌症［1］。我国肺癌的发生率和死亡率均排在恶性肿瘤的首位［2］。因此，明确肺癌发生发展的机制意义重大。

非编码RNA（non-coding RNA，ncRNA）是不编码蛋白质的RNA，在多种肿瘤的发生发展的调控中起着至关重要的作用［3-5］。ncRNA根据结构可分为环状RNA和线性RNA，其中线性RNA根据长度可分为微RNA（microRNA，miRNA）和长链非编码RNA（long non-coding RNA，lncRNA）［6］。lncRNA是超过200个核苷酸的ncRNA，可通过组蛋白修饰、染色质重塑、与转录因子的相互作用以及DNA甲基化等方式调控基因活性［7］。大量研究［8-11］表明，lncRNA在多种肿瘤中广泛表达，其异常表达与非小细胞肺癌的增殖、迁移、侵袭等密切相关，但其作用机制尚未明确。在与肿瘤相关的lncRNA中，关于ATP6V1B1-AS1的研究尚未见报道。

本研究通过体外实验探讨ATP6V1B1-AS1在非小细胞肺癌细胞中的表达及其对于非小细胞肺癌增殖和侵袭的影响；并利用生物信息学分析其作用机制，旨在为非小细胞肺癌的治疗提供新的靶点。

1 材料与方法

1.1 细胞来源及处理

非小细胞肺癌细胞系（A549、SK-MES-1、1299、H460）及正常人支气管上皮细胞系（16-HBE）购自中科院细胞库。10%胎牛血清（美国CLARK Bioscience公司）配置的1640培养基（以色列Biological Industries公司）、MEM培养基（美国Hyclone公司）37 ℃，5%CO2以及饱和湿度中培养。

1.2 总RNA提取及实时定量PCR（quantitative real-time PCR，qRT-PCR）检测

非小细胞肺癌细胞系及正常人支气管上皮细胞系总 RNA 均使用 Trizol 试剂提取。使用 Prime Script™RT reagent Kit 反转录试剂盒（日本TaKaRa公司）反转录和细胞的总 RNA后，使用SYBR®Premix Ex TaqTMⅡ试剂（日本TaKaRa公司）QuantStudio 1 Real-time PCR 仪用进行qRT-PCR检测。主要引物：ATP6V1B1-AS1，正向引物，5’-TCATTTTCATGAATG CTGCCTCT-3’；反向引物，5’-CTGTGCAAGAATCAC CGTGC-3’；……