高永博 洪 滔

龈沟液是通过沟内上皮和结合上皮从牙龈结缔组织渗入到龈沟内的液体。龈沟液在牙龈组织的防御体系中起着重要作用。龈沟液内含有多种细胞因子、受体、抗体-补体系统成分、电解质、蛋白酶等[1]。研究龈沟液的量及内容的变化，对了解牙周疾病的发生机制、病情变化及治疗效果等均有重要意义[2]。本研究比较了牙龈炎全口洁治，龈缘龋Z350 纳米树脂修复前后龈沟液内天冬氨酸氨基转移酶（aspartate transaminase，AST）、弹性蛋白酶（elastase，EA）、Ⅱ型胶原酶（type Ⅱcollagenase，COL-Ⅱ）的变化，报道如下。

1 临床资料

选择2017 年6 月至2020 年12 月杭州市红十字会医院口腔科就诊的伴慢性牙龈炎颊侧颈部龈缘龋患者14 例，男9 例，女5 例，平均年龄20.3 岁，每位患者至少有四颗及以上患牙需要充填治疗，且龋损未累及牙髓，牙龈炎症局限于牙龈组织无附着丧失。本研究获得杭州市红十字会医院伦理委员会审核通过，所有患者均签署知情同意书。

2 方 法

2.1 牙龈炎全口洁治前龈沟液收集 将滤纸条裁成2 mm×4 mm 大小，每四个滤纸条装入1 个离心管，消毒、称重备用。龈沟液收集前轻轻去除龈上菌斑，清洁牙面，棉球隔湿后轻轻吹干牙面。将滤纸条插入龈缘下约1 mm，静置30 s。弃去有血液污染的标本。放入离心管，称重，-80 ℃冰箱冻存。每四颗患牙收集的龈沟液放入1 个标本收集管内。标本测量前，同一患者的两个同类标本管合并为1 个标本。

2.2 牙龈炎全口洁治 龈上及龈下2 mm 常规全口超声洁治。

2.3 Z350 修复前龈沟液收集 牙龈炎全口洁治1周后龈沟液Z350 修复前收集龈沟液。

2.4 窝洞制备及充填 1 周后复诊，龋损部位排龈线排龈，去腐备洞Z350 纳米树脂（美国3M 公司NE17150）修复，细金钢砂车针修整打磨外形，矽离子抛光。第3 次收集龈沟液，即Z350 修复后1 周龈沟液。

2.5 龈沟液AST、EA、COL-Ⅱ测定

2.5.1 样本处理 放有滤纸的EP 管解冻后，每管加入70 μL 0.01 mol/L 的PBS 缓冲液（pH=7.4），室温下振荡1 h，高速离心机离心5min（4 ℃，1000 r/min），提取上清液，同一患者的2 个同类标本管合并为1个标本。计算取样前后重量差为标本质量，样本浓度=测量浓度×（标本质量＋0.07）/标本。

2.5.2 EA、AST、COL-Ⅱ检测 酶标仪在405 nm 下测定样本光密度，EA 结果以每样本光密度值表示。全自动生化分析仪检测各样本AST 含量。按试剂盒（上海联迈生物，批号LM-981-ES）说明步骤底物法测量OD 值，根据标准曲线计算样本COL-Ⅱ含量。

2.6 统计学方法 应用SPSS 18.0 对数据进行统计处理，符合正态分布的计量资料数据以均数±标准差（）表示，组间比较采用t 检验；非正态数据采用非参数秩和检验。以P＜0.05 为差异有统计学意义。

3 结果

3.1 牙龈炎全口洁治前后1 周龈沟液AST、EA、COL-Ⅱ比较 牙龈炎全口洁治后1 周龈沟液内AST、EA 含量低于治疗前（P＜0.05）；COL-Ⅱ含量治疗后较治疗前降低但差异无统计学意义（P＞0.05）。见表1。

表1 牙龈炎全口洁治前后龈沟液AST、EA、COL-Ⅱ水平比较（）

表1 牙龈炎全口洁治前后龈沟液AST、EA、COL-Ⅱ水平比较（）

注：AST 为天冬氨酸氨基转移酶；EA 为弹性蛋白酶；COL-Ⅱ为Ⅱ型胶原酶

3.2 Z350 修复前后龈沟液AST、EA、COL-Ⅱ比较

Z350 修复龈缘龋后，龈沟液内三种酶含量稍降低，但差异无统计学意义（P＞0.05），见表2。

表2 Z350 纳米树脂修复前及修复后1 周龈沟液AST、EA、COL-Ⅱ水平比较（）

表2 Z350 纳米树脂修复前及修复后1 周龈沟液AST、EA、COL-Ⅱ水平比较（）

注：AST 为天冬氨酸氨基转移酶；EA 为弹性蛋白酶；COL-Ⅱ为Ⅱ型胶原酶

3.3 Z350 修复前后龈沟液流量比较 Z350 修复前及修复后1 周龈沟液流量数据呈非正态分布，Mann-Whitney 两样本秩和检验α=0.05 水平时，龈缘龋修复前龈沟液（N+秩均）39（30.88）与修复后1 周龈沟液流量（N＋秩均）22（31.20）比较，差异无统计学意义（Z=0.068，P=0.946）。

4 讨论

牙周炎动物模型试验表明，长期菌斑堆积，牙龈炎症可以向深层组织发展造成附着丧失，最终导致牙周炎的发生。第四次全国口腔健康流行病学调查报告显示，目前我国成年人的牙周健康情况不容乐观，牙龈炎和牙周炎的患病率居高不下[3-4]。其超高的发病率已经造成巨大的疾病负担和社会经济影响[5-7]。

牙龈炎和牙周炎早期的一个重要病理变化过程均是牙龈炎症，牙龈炎症的发生发展在一定程度上能揭示牙周炎的发病机制[8]。EA 可破坏多种结缔组织，在牙周组织的破坏过程中起重要作用[9]。牙周炎患者经牙周治疗后唾液内EA 含量明显下降[10-12]。这与本研究结果一致，随着炎症缓解EA 表达降低。AST 与牙周炎症状态呈高度相关性，组织破坏时，AST 大量出现于细胞外环境[1，13]。COL-Ⅱ通过降解胶原导致牙周组织破坏，其活性水平也随着牙周炎症的加重及牙周袋的加深而增加[14]。本研究结果显示，牙龈炎症控制后AST、EA 表达明显降低，但COL-Ⅱ的变化不明显。AST、EA 在牙龈炎症早期明显高表达于龈沟液内，牙龈炎症控制后龈沟液内含量降低。AST、EA 在牙龈炎症早期段高表达，对检测早期牙周炎症有一定的意义。COL-Ⅱ在牙龈炎症状态表达不明显，这可能是由于COL-Ⅱ随着牙周炎症状加重表达逐渐增加，但在炎症早期表达不明显。

Z350 治疗楔状缺损取得较好的临床效果[15]。本研究结果显示，龈缘龋损Z350 修复前后三种酶的浓度差异无统计学意义。其对牙周组织产生炎性刺激轻微，具有良好的生物相容性。Z350 修复龈缘龋损前后龈沟液流量差异无统计学意义，与酶的检测结果一致。

龈沟液内酶的检测虽然在牙龈炎症的早期诊断上有优势，但也有明显的不足。首先，健康牙龈龈沟液量极少，收集足够检测量龈沟液临床操作困难。本研究将四颗牙齿收集的龈沟液标本作为一个检测标本，测量阶段仍需合并同一患者标本。样本数量受到一定程度影响。其次，龈沟液收集过程中极易受到牙龈上皮溃疡程度及牙龈炎症状态影响，牙龈炎症充血水肿时，牙龈易出血，增加取样难度。龈沟液量少、龈沟液称量、存储都对后续检测有影响，进而使得各种细胞因子、酶类检测结果差异很大[16]。因此，通过龈沟液内标志物对牙龈炎、牙周炎的研究仍需进一步探索。