柱前衍生-高效液相色谱法测定婴幼儿食品和乳品中胆碱含量
2023-01-13卢越圻金志浩袁雯菲
卢越圻, 孙 洁*, 金志浩, 薛 麟, 袁雯菲
1.中检科(上海)测试技术有限公司,上海 201206;2.通标标准技术服务(上海)有限公司,上海 200233
胆碱具有促进大脑发育、促进神经系统的信息传递等功能[1]。胆碱通常是以氯化胆碱或酒石酸胆碱的形式添加到婴幼儿配方食品中的。我国食品安全国家标准GB 10765—2010[2]、GB 10767—2010[3]等对婴幼儿配方食品和其他食品中胆碱的含量有明确的限量规定。目前对食品中胆碱含量的检测主要包括雷氏盐比色法[4]、酶比色法[4-6,11]、离子色谱法[11]、HPLC-MS法[7,11]、HPLC-ELSD法[8]、UPLC-FLD法[9,10]等。其中酶比色法(如国标GB 5413.20—2022第一法)使用较多、较为经典,但是成本高、效率低、背景干扰因素较多,且不适用于试样中维生素C含量大于100 mg/100 g的样品[6],现有的国标和文献里暂时未出现使用本方法用于胆碱的测定,因此本文首次尝试使用高效液相色谱法测定胆碱含量,弥补国标方法检测胆碱含量成本高、耗时长、工作量大、维生素C等还原性成分过高影响检测等方面的不足。
1 材料与方法
1.1 仪器与试剂
胆碱酒石酸氢盐标准品(Dr.)、芴甲氧羰酰氯(Fmoc-Cl)、乙腈(色谱纯)、硼酸、氢氧化钠、磷酸(优级纯)、正己烷(色谱纯)、十二水合磷酸氢二钠(色谱纯)、十水合四硼酸钠(色谱纯)、盐酸(优级纯)(除注明外均为分析纯)。衍生剂:10 mg/mL的Fmoc-Cl乙腈溶液。缓冲液:0.4 mol/L的硼酸钠缓冲液(pH 11.0)。流动相A:十二水合磷酸氢二钠9.0 g,十水合四硼酸钠9.5 g,加水2 L,用盐酸调pH至8.2。流动相B:乙腈。
赛默飞液相色谱仪U3000配荧光检测器、日本岛津RF-6000荧光分光光度计。
1.2 色谱条件
色谱柱:Agilent Eclipse XDB-C18 Column(4.6 mm×250 mm,5 μm);流动相:流动相A∶流动相B=65∶35;流速:1.0 mL/min;检测波长:荧光波长:激发波长265 nm,发射波长315 nm;……
