梁泽梅，梁进芳，黄飞

云浮市中心血站，广东云浮 527300

近年来，冷沉淀凝血因子在临床中应用广泛，冷沉淀是由新鲜冰冻血浆制备的血液制品。血浆冷沉淀中的Ⅷ因子及纤维蛋白原，可治疗轻型甲型血友病、纤维蛋白原缺乏症、弥散性血管内凝血、血管性血友病等患者[1-2]。冷沉淀中的凝血因子Ⅷ易受制备时间、温度等多种因素的影响，Ⅷ因子和纤维蛋白原含量与冷沉淀制备过程有密切关系，若选择不合适的制备方法，不能确保冷沉淀的活性，临床治疗效果欠佳[3-4]。只有选择合适的制备方法，才能最大限度开发利用血液资源、确保冷沉淀的活性，减少损耗，提高血液质量，保证临床输血的安全性[5]。目前全国各地血站制备冷沉淀的方法通常有离心法和虹吸法两种，本研究选取2020年6月—2021年6月云浮市中心血站制备的合格新鲜冰冻血浆60袋（100 mL/袋），比较离心法和虹吸法制备冷沉淀的质量，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 设备与试剂

冷冻离心机（型号9942）；冰冻血浆解冻箱（KJX-Ⅲ）；血浆速冻机（SDJ-20）；封管热合机（SE250）；电子天平（ES-3101C）；血液分浆夹；微电脑配平仪（WGPPY-IV）；贮血 冰箱[MBR-506D(H)]；-40℃低温 冰箱（MDF-U5411）；海尔医用低温冰箱（DW-25W300）;全自动凝血仪（型号ACL7000）；以下试剂盒均购自[沃芬医疗（北京）公司]：纤维蛋白原测定试剂盒，APTT试剂，CaCl2，乏Ⅷ因子血浆。

1.2 纳入与排除标准

用200 mL四联血袋（抗凝剂为CPDA-1）采集经初筛符合GB18467-2011《献血者健康检查要求》规定的献血者200 mL全血,且采集时间≤7 min，在采集后8 h内完成血浆分离，并置于血浆速冻机内进行速冻，速冻完成后转移至低温冰箱中保存,进行冷沉淀制备前进行检测，排除不合格的样本。

1.3 研究对象

随机选取云浮市中心血站制备的合格新鲜冰冻血浆60袋（100 mL/袋），抽签法随机分成A、B两组，每组30袋（100 mL/袋）。研究经伦理委员会批准（伦理号：2020A041）。A组采用离心法制备冷沉淀，B组采用虹吸法制备冷沉淀。对比两种制备冷沉淀的方法及检测结果，寻求安全、高效的冷沉淀制备方法，确保冷沉淀质量安全。

1.4 方法

1.4.1 离心法制备冷沉淀A组将30袋合格新鲜冰冻血浆于前一晚取出，放置4±2℃冰箱中过夜融化（约14 h）。当血浆基本融化时，取出血浆，在4±2℃的大容量冷冻离心机重离心,按设定好的离心程序（3 880 r/min、8 min、4±2℃）进行离心。离心完成后，轻轻取出血袋，将血袋放于分浆夹上，松开管道夹，将上层血浆利用分浆夹的压力和虹吸原理转移至空袋中，然后将剩余的40～50 mL血浆与沉淀物进行混合，制备成冷沉淀，宜在制备后1 h内完成速冻，速冻后将其快速置于低温冰箱中保存备用。

1.4.2 虹吸法制备冷沉淀B组将30袋合格新鲜冰冻血浆取出，放置4±2℃冰冻血浆解冻箱中，取一空袋，悬挂于解冻箱外，位置要低于血浆袋，松开血袋夹，融化的冰冻血浆通过虹吸原理逐渐流入空袋，当融化至剩余40～50 mL血浆与沉淀物时，闭合导管，停止虹吸,将剩余血浆与沉淀物进行混合，制备成冷沉淀,宜在制备后1 h内完成速冻，速冻后将其快速置于低温冰箱中保存备用。

1.4.3 标本检测 分别从A、B两组共60袋冷沉淀中留取样本，用全自动凝血仪检测两种方法制备的冷沉淀的Ⅷ因子浓度和纤维蛋白原浓度，电子天平称量血袋重量，计算容量。含量=浓度×容量。

1.4.4 质量合格标准 参照国家标准GB18469-2012《全血及成分血质量要求》，来源于200 mL全血：纤维蛋白原含量≥75 mg，Ⅷ因子含量≥40 IU。

1.5 观察指标

①两种方法制备冷沉淀的Ⅷ因子和纤维蛋白原含量。

②两种方法制备冷沉淀的Ⅷ因子和纤维蛋白原合格率。

1.6 统计方法

采用SPSS 26.0统计学软件进行数据处理，符合正态分布的计量资料以（）表示，组间差异比较采用t检验；计数资料以百分比（%）表示，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组制备冷沉淀的Ⅷ因子和纤维蛋白原含量比较

B组Ⅷ因子含量、纤维蛋白原含量均高于A组，差异有统计学意义（t=2.143、2.832，P＜0.05），见表1。

表1 两组制备冷沉淀的Ⅷ因子和纤维蛋白原含量比较(xˉ±s)Table 1 Comparison of factorⅧand fibrinogen content of cold precipitation prepared in two groups(xˉ±s)

2.2 两组制备冷沉淀的Ⅷ因子和纤维蛋白原合格率比较

两组制备冷沉淀的Ⅷ因子和纤维蛋白原含量均符合国家标准，合格率均为100%，差异无统计学意义（P＞0.05）。

3 讨论

随着临床输血管理的加强，冷沉淀凝血因子的需求逐渐上升，对冷沉淀的质量、输血的安全性也越来越重视[6]。冷沉淀凝血因子是一种广泛用于止血、治疗凝血功能障碍疾病的重要血液制品，其有效成分包括凝血因子Ⅷ、纤维蛋白原、纤维结合蛋白等，适用于缺乏Ⅷ因子及纤维蛋白原而出血不止、血管性血友病等患者，也可用于恶性肿瘤术后出血、严重创伤、烧伤、弥散性血管内凝血等患者的替代治疗，促进创伤烧伤愈合，防止伤口感染，阻止弥散性血管内凝血扩展[7-9]。冷沉淀中的凝血因子Ⅷ较不稳定、半衰期较短、活性易丧失，在制备过程中对时间、温度等多种因素的要求较高，易发生变性、沉淀，不能确保冷沉淀的活性，临床治疗效果欠佳[10]。目前，制备冷沉淀的方法通常有离心法和虹吸法两种，离心法操作过程中人为影响因素相对多一些，操作过程相对复杂，而虹吸法操作简单，不仅人为影响因素比较少，且所需仪器少，更为经济，因此，采用虹吸法制备冷沉淀更便捷。冷沉淀的质量影响着治疗效果，血站应选择科学、安全、高效的冷沉淀制备方法，确保血液制品质量安全，对治疗效果有重要临床意义[11]。本研究分别采用离心法和虹吸法制备冷沉淀,采用全自动凝血仪检测两种方法制备的冷沉淀,比较两组的检测结果，从而选择更优的制备方法。

本研究结果显示，B组制备的冷沉淀中Ⅷ因子含量（79.68±25.28）IU、纤维蛋白原含量（206.47±59.78）mg均高于A组（P＜0.05），均符合国家标准；在李庚娣等[12]的研究中，虹吸法制备冷沉淀中的Ⅷ因子含量（80.0±29.3）IU、纤维蛋白原含量（131.6±34.8）mg高于离心法（P＜0.05），与本研究所得结果基本一致。表明与离心法相比较，采用虹吸法制备的冷沉淀Ⅷ因子、纤维蛋白原含量更高。分析原因在于A组采用离心法制备冷沉淀，首先将原料血浆提前一晚置于4±2℃冰箱中过夜融化（约14 h），当血浆基本融化时，取出血浆，进行重离心，然后将上层血浆移至另一空袋中，剩余的40～50 mL血浆和沉淀物进行混合，即为冷沉淀[13]。由于冰箱中温度不稳定，且不易控制温度，血浆融化的速度不一致，易引起凝血因子活性降低，且回收率下降。此外，将原料血浆置于冰箱内融化时间过长，易发生纤维蛋白析出，导致冷沉淀量减少，影响Ⅷ因子的活性，且对操作者的技术要求较高[14]。因此，采用离心法制备的冷沉淀Ⅷ因子与纤维蛋白原含量降低，凝血因子Ⅷ回收率降低，致使冷沉淀合格率降低。虹吸法采用4±2℃冰冻血浆解冻箱融化血浆，血浆融化后通过虹吸作用流入悬挂于解冻箱外的空袋中，剩下40～50 mL血浆与沉淀物进行混合，制备成冷沉淀。采用冰冻血浆解冻箱可准确控制解冻箱温度保持在4±2℃，使原料血浆融化温度和速度保持一致，可以保证良好的融化环境[15]。有研究指出，冰冻血浆在1 h内融化，制备的冷沉淀质量最为理想，在提取冷沉淀的过程中时间越短越好[16]。因此，与离心法相比较，虹吸法制备的冷沉淀Ⅷ因子含量与纤维蛋白原含量较高，Ⅷ因子和纤维蛋白原的回收率较高，冷沉淀合格率相对较高。在冷沉淀的质量控制上，离心法比虹吸法的人为影响因素多，且操作过程比较复杂，而虹吸法步骤相对简单，受外界因素影响较小，所需仪器少且对操作者的要求较低[17]。

两组制备的Ⅷ因子和纤维蛋白原含量均符合国家标准，合格率均为100%，差异无统计学意义（P＞0.05）；表明两种冷沉淀制备方法的合格率均较高。但是B组制备冷沉淀的融化时间短于A组的融化时间，凝血因子Ⅷ与纤维蛋白原较不稳定，在冷沉淀制备过程中受融化时间、温度的影响较大，因此在制备冷沉淀时，应选择人为因素影响较小的方法，确保冷沉淀质量，以达到较好的临床治疗效果。A组采用离心法制备冷沉淀，将原料血浆置于4±2℃冰箱中过夜融化（约14 h），不易控制温度，融化时间较长，易导致纤维蛋白析出，影响Ⅷ因子的活性，凝血因子Ⅷ与纤维蛋白原回收率降低[18]。虹吸法采用冰冻血浆解冻箱融化血浆，可准确控制温度在4±2℃，融化环境较好。本研究的局限性在于采集的样本量较少，后续还会对更多样本进行统计分析，且对冷沉淀制备工艺进行完善和创新，以期获得更为理想的制备工艺。

综上所述，两种制备冷沉淀凝血因子的方法均符合国家标准，但与离心法相比，采用虹吸法制备的冷沉淀Ⅷ因子含量、纤维蛋白原含量更高、更安全高效，对提升临床治疗效果有重要应用价值，建议血站进一步应用推广。