金科华，游云悠，魏友煜，左 越，柯志强，尧 青，刘 洁

作者单位：湖北科技学院1糖尿病与血管病变湖北省重点实验室、2医学部基础医学院、3医学部基础医学院2018级卓越医师班、4医学部健康医学院，咸宁 437100

多数肿瘤细胞有两大代谢特征，一是通过从头合成途径合成[1]核苷酸；二是脂肪酸合成旺盛。磷酸戊糖途径(pentose phosphate pathway，PPP)的中间产物5-磷酸核糖和NADPH分别是核苷酸和脂肪酸合成的必须原料。抑制PPP可抑制肿瘤细胞DNA合成和脂肪酸合成，抑制肿瘤细胞的增殖。6-磷酸葡萄糖脱氢酶(glucose 6-phosphate dehydrogenase，G6PD)是PPP的限速酶，催化6-磷酸葡萄糖(glucose 6-phosphate，G6P)和NADP+转化为6-磷酸葡萄糖酸内酯和NADPH(在340 nm波长处有特征吸收值)。高活性的G6PD与肿瘤发展和不良预后密切相关[2-3]，G6PD缺失与肿瘤的生长呈负相关[4-5]。6-氨基烟酰胺通过抑制G6PD，诱导肿瘤细胞产生氧化性胁迫，提高肿瘤对抗癌药物和放疗的敏感性[6-8]。脱氢表雄酮(dehydroepiandrosterone，DHEA)通过抑制G6PD能有效抑制肿瘤增殖[9]。然而，DHEA治疗非小细胞肺癌时，易导致患者产生严重的抑郁和疲倦[10]，6-氨基烟酰胺有神经毒性[11]，限制了它们在临床上的应用，故发现更多靶向G6PD的抑制剂具有重要意义。为此，拟在原核生物中表达人G6PD，并建立其体外抑制剂筛选模型，为发现G6PD抑制剂奠定基础。

1 材料与方法

1.1 主要材料大肠杆菌BL21(DE3)、质粒pET-28a为湖北科技学院基础医学院保存。G6PD cDNA(与Genebank中NM_001360016.2的G6PD序列一致)由厦门大学生命科学学院提供。DNA聚合酶、DNA连接试剂盒购自TaKaRa(大连)公司。大肠杆菌Top10感受态细胞购自北京全式金生物技术有限公司。引物、质粒抽提试剂盒、卡那霉素(Kana)、凝胶回收试剂盒、G6P、NADP购自上海生工生物工程有限公司。……