吴 伟，程 龙，王 杰，杨传蕾，尚玉强

作者单位：华中科技大学同济医学院附属武汉中心医院心脏大血管外科，武汉 430000

血管钙化(vascular calcification，VC)是动脉粥样硬化、慢性肾病、糖尿病、高血压、绝经后综合征、动脉狭窄和老年患者的常见病理表现[1]。VC的病理异常是导致心血管发病率和病死率高的重要因素之一[2-3]。骨保护素(osteoprotegerin，OPG)为肿瘤坏死因子受体超家族的成员之一，主要作用是抑制破骨细胞形成，促进破骨细胞调亡，细胞核因子κB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factor κB ligand，RANKL)能够与破骨细胞表面的RANK结合，促进破骨细胞前体分化和活化形成成熟的破骨细胞[4-5]。大量的研究表明VC主要表现为血管平滑肌(vascular smooth muscle cell，VSMC)发生向成骨细胞的表型转化过程，目前的研究[6-7]认为OPG/RANKL/RANK在血管壁平滑肌细胞收缩表型向成骨表型转化中发挥了重要作用。结缔组织生长因子(connective tissue growth factor，CTGF)是一种由349个氨基酸组成，分子量为34～38 ku的富含半胱氨酸的分泌肽。有研究[8]表明，CTGF可促进成骨细胞OPG分泌，并抑制RANKL的表达，提示CTGF可能间接抑制成熟破骨细胞活化的作用。但是CTGF是否在血管钙化过程中能够通过调控OPG/RANK/RANKL信号通路来影响疾病发生的进展需要进一步的研究。因此，该研究通过沉默细胞中CTGF基因，构建体外血管钙化模型，验证血管钙化过程中CTGF对OPG/RANK/RANKL信号通路的调控作用。

1 材料与方法

1.1 实验材料与仪器大鼠胸大动脉平滑肌A7r5来源于中国科学院上海细胞库；胎牛血清购自天津TBD公司；Opti-MEM和DMEM购自美国Gibco公司；CaCl2和10 mmol/L β-甘油磷酸盐购自美国sigma公司；LipofectamineTMRNAiMAX购自美国Invitrogen公司；茜素红法钙质染色试剂盒购自上海歌凡生物技术有限公司；……