郑传明，纪 忠，徐志鹏，杜召辉，窦贺贺，姜 海，王振杰

作者单位：蚌埠医学院第一附属医院急诊外科，蚌埠 233000

急性胰腺炎(acute pancreatitis，AP)是一种常见的外科急腹症，其发病率和病死率都很高，目前对其发病机制知之甚少，也没有特异性或有效的治疗方法[1-2]。多项研究[3-4]表明，AP的发病机制与自噬失调和持续的炎症密切相关。中文名小RNA(microRNA，miRNA)是长度为18～25 nt的单链非编码小分子RNA，近年来其在AP中的作用受到了广受关注。相关研究[5-7]表明，miR-146a在炎症和先天性免疫应答中起着重要的调节作用，且有个别报道[8]显示miR-146a有作为AP预后标志物的潜力，但其在AP中的具体作用机制尚未见研究。该研究利用牛磺石胆酸3磷酸盐(taurolithocholic acid 3-sulphate，TLCs)处理AR42J细胞建立AP模型，探究miR-146a在AP中的作用及机制，为AP的机制研究提供新思路，更为AP精准诊疗提供潜在靶点。

1 材料与方法

1.1 材料TLCs(美国Sigma-Aldrich公司)，miR-146a mimic及阴性对照(miR-ctrl)、si-IRAK1及阴性对照(si-ctrl)(广州锐博生物技术有限公司)，引物(苏州金唯智生物科技有限公司)，IL-1受体相关激酶1(IRAK1)、actin抗体(美国Abcam公司)、LC3、p62抗体、兔二抗(美国CST公司)，白细胞介素6(interleukin-6，IL-6)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)试剂盒(杭州联科生物技术有限公司)，Ham's F-12K培养基、血清(美国Gibco公司)。逆转录试剂盒及qPCR试剂盒(日本Takara公司)。

1.2 方法

1.2.1细胞培养及AP模型构建 细胞复苏于细胞培养瓶中，用含有20%的胎牛血清的Ham's F-12K培养基培养，细胞培养箱中设置的条件为37℃、5%CO2。细胞传3代后，在细胞处于对数生长期时进行细胞功能学实验。将细胞种于6孔板内，分别加入100、200 μmol/L TLCs，40 min后收集细胞进行后续实验。

1.2.2RNA抽提及逆转录 将处理好的细胞均匀地铺在培养板内，培养适当时间后弃去培养基，用PBS洗1次，每孔加入1 ml TRIzol，充分收集细胞，加入200 μl氯仿，充分混匀后室温静置5 min；……