朱锐秋，殷佩浩

作者单位：安徽医科大学上海普陀中心临床学院，上海 200062

结直肠癌(colorectal cancer, CRC)是新发癌症病例的第三大原因，也是癌症相关死亡的第二大常见原因。转移频率和耐药性的增加导致 CRC 患者的预后不良。据估计，50%～60%的CRC患者可能有转移；转移性CRC患者的5年总生存率仅为13.3%，而局限期患者的5年总生存率为91.1%[1-2]。其中，肿瘤微环境(tumor microenvironment, TME) 是癌症进展和转移的必要先决条件。肿瘤相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblast, CAF)是CRC基质的主要细胞类型之一，其通过利用旁分泌因子在肿瘤的增殖、转移、血管生成和化学抗性中起重要作用[3-4]。越来越多的证据表明，STAT3信号通路的激活是CRC细胞上皮间充质转化 (epithelial-mesenchymal transition, EMT)和侵袭性增加的关键因素，但关于CAF来源的白细胞介素-6 (interleukin- 6, IL-6)对于STAT3信号通路的激活的报道甚少[5]。蟾毒灵是从蟾蜍毒液中分离的主要生物活性成分，由于其对肿瘤细胞凋亡、转移和增殖的影响，已被证实是一种有效的抗肿瘤药物。有研究[6]表明，蟾毒灵具有靶向STAT3通路的作用。该研究旨在探索蟾毒灵对于CAF介导的肿瘤细胞侵袭和转移的作用。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1药品与试剂 DMEM培养基、RPIM-1640培养基、胎牛血清(FBS)、双抗、胰酶均购自美国Gibco公司；细胞培养耗材和Transwell小室购自美国Corning公司；基质胶购自美国BD公司；RIPA裂解液、上样缓冲液均购自美国Cell Signaling Technology公司；IL-6 ELISA试剂盒购自武汉博士德生物科技有限公司 (Human, EK0428)；兔源FAP抗体 (英国Abcam公司, ab53066)、鼠源α-SMA (英国Abcam公司, ab124964)、鼠源STAT3抗体 (美国CST公司, 9139S)、兔源P-STAT3抗体 (美国CST公司, 9145S)、兔源E-cadherin (美国CST公司, 3195S)、兔源N-cadherin (美国CST公司, 13116S)、兔源Snail (英国Abcam公司, ab180714)、鼠源VIM (美国CST公司, 5741S)和鼠源β-actin (英国Abcam公司, ab6276)；……