徐 源，杨 杰，姜健楠，严章炜，刘 健，向 欣

作者单位：贵州医科大学附属医院神经外科，贵阳 550004

胶质瘤是发病率最高的中枢神经系统恶性肿瘤，起源于神经外胚层的脑神经胶质细胞[1]。胶质瘤呈现多灶发展，对放疗和化疗不敏感，且较易复发，因而胶质瘤患者的平均生存期较短，预后很差[2]。探究胶质瘤细胞增殖、侵袭的分子机制对临床的分子靶向诊疗可能具有重要价值。长链非编码RNA(lncRNA)是一类没有蛋白编码潜能的单链RNA，长度通常大于200个核苷酸[3]。研究[4]显示，lncRNA在胶质瘤组织中高表达或表达缺失，能够促进或抑制胶质瘤细胞生长、侵袭，发挥癌基因或抑癌基因作用。RNF185-AS1定位于染色体22，是近年来新明确的一个lncRNA，RNF185-AS1在肝细胞癌中表现为癌基因作用，沉默RNF185-AS1能够抑制肝细胞癌的生长、转移[5]。RNF185-AS1在胶质瘤中的表达和作用并无相关报道。miR-637是一种抑癌基因，过表达miR-637能够抑制骨肉瘤、肝癌、卵巢癌等肿瘤细胞的增殖、侵袭[6]。该研究采用小干扰RNA沉默胶质瘤细胞中RNF185-AS1表达，明确其对胶质瘤细胞生长和侵袭的调控功能，探讨miR-637在此过程中的作用。

1 材料与方法

1.1 实验材料人脑星型胶质正常细胞系HEB和人胶质瘤细胞系(SNB-19、LN382、U87MG、U251)购自美国ATCC公司。LipofectamineTM 3000和qRT-PCR试剂盒购自美国Invitrogen公司。DMEM/F12培养基、胎牛血清、RPMI 1640培养基购自美国Gibco公司。pcDNA-sh-Con对照质粒、miR-637 mimic、pcDNA-sh-RNF185-AS1质粒(AACAAGTCAATAATGACGGAGCCTCGAGGTTTAGGGTGGT)、miR-Con mimic、双荧光素酶报告基因载体(野生型pGL3-WT-RNF185-AS1和突变型pGL3-MUT-RNF185-AS1)购自上海生工生物工程有限公司。Transwell小室、基质胶、MTT试剂盒购自美国Corning公司。双荧光素酶报告基因试剂盒购自美国Promega公司。一抗兔源HMGA1、β-Tubulin、CDK3、Vimentin、N-Cadherin购自美国BD公司，二抗羊抗兔抗体购自上海碧云天生物科技有限公司。……