吴桐，杨鹏飞，蒋飞荣，聂晶,3，卢素云，谢奎，侯艳梅，邓友田

（1.海普诺凯营养品有限公司，长沙 410000；2.湖南安生美药物研究院有限公司，长沙 410000；3.中南大学，长沙 410000）

0 引言

作为一种常见的骨骼性疾病，骨质疏松症可随着病情的发展严重影响中老年人的生活质量。根据2018年中国骨质疏松症流行病学调查的结果显示，我国50岁及以上的中老年人骨质疏松症患病率为19.2%。其中，男性的患病率水平为6.0%，女性的患病率水平为32.1%，骨质疏松症已经成为我国50岁以上人群的重要健康问题，中老年女性骨质疏松问题尤为严重[1]。骨折是骨质疏松危害性最直接的结果，也是老年患者致残和致死的主要原因之一。为了预防和减轻骨质疏松症带来的潜在家庭和社会负担，“健康骨骼”已被国家卫生健康委纳入《“健康中国2030”规划纲要》专项行动[2]，以宣传和倡导健康的生活方式，实现对骨质疏松症的预防与管理。在众多的预防骨质疏松的方式中，合理的营养和饮食是其中重要的一种[3]。

乳制品因其含有丰富营养物质，如多种人体必需氨基酸、丰富的维生素及矿物质，已成为日常生活中必不可少的营养品，研究表明摄入乳制食品有利于成年人骨骼的健康[4]。羊奶中含有丰富的酪蛋白、乳清蛋白、矿物质、维生素等营养物质和生物活性因子，其营养价值总体上优于牛奶，且更接近于人奶，被称为“奶中之王”[5-6]。近年来，随着人们对营养与健康观念重视，高营养价值的羊奶及其以羊奶为基础的羊乳基营养粉受到人们的广泛关注。相较于牛乳制品，目前关于羊奶粉功效的研究，特别是羊奶粉对骨质疏松影响的研究仍比较缺乏。因此本研究通过构建骨质疏松大鼠模型，初步评价了两款羊乳基营养粉对去卵巢骨质疏松模型大鼠骨密度的影响，以期为羊奶粉在预防和减轻骨质疏松症中的应用提供科学依据。

1 材料和方法

1.1 受试物

益生菌益生元（以下简称双益）羊乳基营养粉、高钙富硒（以下简称高钙）羊乳基营养粉，由海普诺凯营养品有限公司提供。依据产品每日推荐饮用量，按体表面积换算成大鼠等效剂量为6.3 g/kg，给样剂量设为等效剂量的2倍，用纯水配制成0.63 g/mL，给样体积20 mL/kg。

1.2 实验动物

SD大鼠90只（SPF级，250～300 g，雌性），湖南斯莱克景达实验动物有限公司。实验动物生产许可证号：SCXK（湘）2019-0004，实验动物使用许可证号：SYXK（湘）2018-0004，实验动物质量合格证：430727201101056048。

1.3 仪器设备

双能X射线骨密度仪，HOLOGIC，Discovery ABone。

1.4 试验方法

1.4.1 造模与给药

检疫结束后，动物按体重随机分为空白对照组和去卵巢组，空白对照组10只大鼠；去卵巢组40只大鼠，用于制备骨质疏松大鼠模型。去卵巢组40只大鼠摘除双侧卵巢后缝合，空白对照组大鼠作为假手术组进行相应的操作，手术技术后进行消毒和庆大霉素干预处理。造模第5天，选取模型动物30只，按体重随机分为模型对照组、双益羊乳基营养粉、高钙羊乳基营养粉，每组各10只动物。卵巢去势后第30天开始，双益羊乳基营养粉组和高钙羊乳基营养粉组动物分别灌胃给予相应剂量的受试物，每天1次，连续8周，空白对照组和模型组给予纯水。试验期间，各组动物均自由摄食与饮水。

1.4.2 指标检测

（1）体重变化：每周对大鼠进行称重1次。

（2）骨密度检测：给药结束后，各大鼠取右侧股骨，剔除筋膜和肌肉，使用骨密度仪测量骨密度。

（3）钙吸收率：于给药第4周记录大鼠3 d的摄食量，并收集大鼠3 d的粪便，计算钙吸收率：

钙的表观吸收率=（摄入钙-粪钙）/摄入钙×100%

1.5 结果统计

本试验数据有效数字修约按照四舍五入进行。统计学分析选用SPSS16.0，数据采用均数±标准差（X±s）表示，进行正态性和方差齐性检验。如果满足正态性（P＞0.05），用单因素方差分析（ANOVA）进行统计分析，并根据方差齐性情况选用LSD+Dunnet（方差齐）或Tamhane’s T2（方差不齐）进行比较分析。如果不满足正态性（P＜0.05），则用Kruskal-Wallis检验，并用Mann-Whitney检验进行两两比较分析。统计结果以α=0.05为检验界限，其中P＜0.05表示有统计学意义，P＜0.01表示所检验的差别有非常显著性意义。

2 结果与分析

2.1 羊乳基营养粉对骨质疏松大鼠体重的影响

如表1所示，与空白对照组相比，随着试验周期的增长，模型对照组大鼠第1周、第2周、第3周、第5周体重明显升高（P＜0.05）。

表1 羊乳基营养粉对骨质疏松大鼠体重的影响(X±s,n=10) g

与模型对照组相比，给样后，双益羊乳基营养粉组和高钙羊乳基营养粉组大鼠体重变化未见统计学差异。但与模型对照组相比，双益羊乳基营养粉组和高钙羊乳基营养粉组大鼠体重均降低；给样8周后双益羊乳基营养粉组和高钙羊乳基营养粉组大鼠体重增重均低于模型对照组。上述结果表明，去除卵巢后，骨质疏松模型大鼠体重可显著增加，双益羊乳基营养粉和高钙羊乳基营养粉均可减缓骨质疏松模型大鼠体重增长。

2.2 羊乳基营养粉对骨质疏松大鼠钙摄入的影响

通过测定给样第4周各组大鼠钙的吸收与排泄，发现与空白对照组相比，模型对照组大鼠摄食量、钙总摄入量、粪便钙含量均显著增加（P＜0.01），双益羊乳基营养粉组和高钙羊乳基营养粉组大鼠钙总摄入量、钙总吸收量均显著增加（P＜0.05）。与模型对照组相比，双益羊乳基营养粉组和高钙羊乳基营养粉组大鼠摄食量、钙总摄入量、粪便钙含 量、钙总吸收量均极显著升高（P<0.01）。结果如表2所示。

表2 羊乳基营养粉对骨质疏松大鼠摄食及钙吸收的影响(X±s,n=10)

与空白对照组相比，模型组大鼠钙总吸收率极显著下降（P<0.01），与模型对照组相比，双益羊乳基营养粉和高钙羊乳基营养粉组大鼠钙总吸收率均极显著升高（P<0.01），钙的吸收率分别提高33%和32%。结果见图1。

图1 骨质疏松大鼠钙吸收率

2.3 羊乳基营养粉对骨质疏松大鼠骨密度的影响

给样8周后，与空白对照组相比，模型对照组大鼠右后肢股骨骨密度极显著降低（P<0.01）说明造模成功。双益羊乳基营养粉组大鼠右后肢股骨骨密度极显著升高（P<0.01），高钙羊乳基营养粉组大鼠右后肢股骨骨密度显著升高（P<0.05），两组骨密度分别提高9%和8%。结果见表3。

表3 羊乳基营养粉对骨质疏松治疗组大鼠骨密度的影响（X±s，n=10）

3 结果与讨论

骨的重建包括破骨细胞(起吸收骨的作用)与成骨细胞(起成骨作用)的协调活动。中年以前骨吸收与骨形成处于平衡状态,但中年开始骨吸收大于骨形成(原因之一是由于老年人血中活性维生素D3水平降低,影响到小肠对钙的吸收,主要依靠贮存的骨钙维持足够的血钙水平),因此导致骨量进行性丢失。妇女绝经后由于雌激素分泌减少，活性维生素D减少，因此在绝经后头几年骨丢失速度较快，骨丢失可发展以致骨质疏松[7]。骨质疏松症的危害日益引起了人们的重视。在此背景下，加重点人群防控，积极倡导居民养成均衡膳食、适量运动等健康生活方式成为落实《“健康中国2030”规划纲要》对骨骼健康工作的要求的重要途径之一[8]。

揭良等[9]文章显示，钙、维生素D、维生素K等是提高骨量的重要原料。刘晓红等[10]通过高蛋白食物、钙等矿物质、维生素D等的搭配方式进行饮食及营养护理，发现饮食及营养护理对老年性骨质疏松患者具有比较理想的护理效果。羊乳凭借其优异的营养价值，可在老年人骨质疏松的防治中发挥重要的作用。山羊乳是钙的良好来源，其钙含量比牛奶高约13%。山羊乳含有丰富的维生素，其中维生素D能调节骨骼中磷酸钙的合成，促进钙在小肠吸收，改善骨骼代谢。维生素D与钙和磷协同作用，共同维护骨骼健康[11]。羊乳中的钙和磷的质量分数均高于奶牛乳、水牛、牦牛乳，近似最佳钙磷比2∶1，易于消化吸收[12]。

本研究通过卵巢去势的方式构建骨质疏松模型大鼠，发现在试验期间模型组大鼠体重可显著增加，与文献研究结果一致[13]，这可能是由于卵巢切除后，雌激素丧失引起脂肪组织堆积[7]。研究表明，卵巢切除后，体内雌激素含量降低是导致大鼠体重增加以及骨质疏松形成的重要因素[10,14]。通过双益羊乳基营养粉组和高钙羊乳基营养粉分别干预骨质疏松模型大鼠，发现两款羊乳基营养粉均能降低因雌激素含量减少导致的体重增加，双益羊乳并可促进骨质疏松大鼠对钙的吸收，钙总吸收率分别提升33%和32%，这可能与羊乳中含有丰富的钙和维生D，以及羊乳易消化吸收有关[12,15-16]。

通过进一步的研究发现，双益羊乳基营养粉组和高钙羊乳基营养粉均具有提升骨质疏松模型大鼠骨密度的作用，分别提升9%和8%。双益羊乳基营养粉对于骨密度的提升略高于高钙羊乳基营养粉的原因可能是由于双益羊乳基营养粉中的嗜酸乳杆菌和动物双岐杆菌在肠道中能生成有机酸，降低肠道pH，增加钙的可溶性和吸收率。

综上所述，双益羊乳基营养粉组和高钙羊乳基营养粉在辅助骨质疏松的预防和治疗中具有良好开发前景和应用价值。